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研究中使用的菌种是麦角菌,具体品种为Claviceps HCB?01712,由上海来益生物药物研发中心提供。菌种的培养过程分为两个阶段。
首先,斜面培养基的配方包括20%的马铃薯提取物,2%的葡萄糖,0.15%的酵母粉,2%的琼脂,pH值调整至6.0。将菌种接种到这种斜面培养基上,然后在24℃的条件下培养4到6天,待菌丝生长成熟后,形成孢子悬液。
接着,进入种子培养阶段,使用1.5%的蔗糖,0.25%的柠檬酸三钠,0.1%的CaCl2·2H2O,0.5%的KH2PO4,0.02%的MgSO4·7H2O,0.01%的酵母粉,0.2%的NH4NO3,0.0007%的FeSO4·7H2O,以及0.0006%的ZnSO4·7H2O。这些成分混合后,pH调整到6.1,进行4天的培养。培养结束后,再将孢子悬液转移到发酵培养基中进行扩大培养。
发酵培养基的配方有所不同,包括30%的蔗糖,1.5%的柠檬酸,0.05%的KH2PO4,0.05%的MgSO4·7H2O,0.01%的酵母粉,0.012%的KCl,0.0007%的FeSO4·7H2O,0.0006%的ZnSO4·7H2O,pH值调整至5.2。在24℃的条件下,继续培养7天,最后得到所需的发酵产物。
实验中使用的设备包括N?1001型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司生产),核磁共振仪Varian?Inova?400,质谱仪Q?Tof micro YAO19,以及紫外和HPLC系统,由Agilent公司DE11108479泵和DAD检测器组成。层析实验则依赖于山东黄海化学试剂厂提供的硅胶柱,以及Merck公司的GF254硅胶板。所有试剂均为分析纯级,香草酸甲酯的标准品由Across公司提供,纯度达到99%以上。
香草酸酯类(如香草酸甲酯及香草酸乙酯)是一类用途十分广泛的香料,不仅可作为香水、护肤护发品、化妆品、理发用品、空气清新剂、止汗露及房屋除臭剂等化工产品的添加剂,还可作为许多食品的调味剂,是食品、烟草、调味品和日化香精的很好定香剂。