发布网友 发布时间:2022-04-24 04:32
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热心网友 时间:2023-10-28 08:12
1. 超净工作台
目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作,具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式(垂直式)和外流式(水平层流式)。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
(1) 侧流式工作台:空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向上流向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌,工作台结构为封闭式;
(2) 外流式工作台:净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,工作台结构为开放式,但进行有害物质实验操作对操作者不利。超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度,符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级,用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L;空气流量应控制在0.75-1.0m3/s;细菌菌落数平均<1个,根据无菌状况必要时需要置换过滤器。
2. 显微镜
倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许,建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。
3. 培养箱
体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,一般最适生长温度为37℃,温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时,变不利于细胞生存,温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此,可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是最佳选择。
(1) 恒温培养箱:应选隔水式或晶体管式自控温培养箱,此类培养箱灵敏度高,温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜,其缺点是只宜于作密闭式培养。
(2) CO2培养箱:目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2(常用浓度为5%),易于稳定培养液pH,适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时,为使培养瓶内与外界保持通气状态,可将瓶盖略微旋松,为避免细胞被污染,使用这种培养方式时,培养箱内空气必须保持清洁,需定期用紫外线照射或酒精消毒,同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养液蒸发,保持箱内相对湿度在100%。
(3) 细胞培养耗材:培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。
4. 烘箱(干燥箱)
用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,烘箱内温度一般要达到160℃以上,通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至100℃时,停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门,以免骤冷导致玻璃器皿破裂,应等温度自然下降至100℃以下后可开门。
5. 水纯化装置
细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合,可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便,可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液*、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。
6. 冰箱
细胞培养实验室必备设备,应专用,不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质,且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。
普通冰箱:储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品,可短期保存组织样本。
-20℃低温冰箱、超低温冰箱:用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂,如酶、血清等。
7. 细胞冷冻储存器
储存器常用的液氮容器,根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素:容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度最低文帝可达-196℃,使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发,需注意观察剩余液氮量,及时补充,避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择,可配置有电子控制器的液氮储存器,实现冻存自动化;并可监测液氮水平和样品温度,确保样品温度始终处于设定温度点;可配置报警系统,设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警;同时具备热气体旁路系统,防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐,从而更有效地保护样品,防止容器内升温。另外,可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮,保证样品安全。
8. 离心机
细胞培养时,通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机;若要做细胞沉降,需要使用80-100G离心力,因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求,有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。
9. 天平
常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平:取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平;取样量100-10mg,选用精确度0.01mg的天平;取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准,可选择有自动校准功能的天平,方便维护。天平使用需要注意清洁,避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。答案来自
热心网友 时间:2023-10-28 08:12
1. 超净工作台
目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作,具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式(垂直式)和外流式(水平层流式)。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
(1) 侧流式工作台:空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向上流向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌,工作台结构为封闭式;
(2) 外流式工作台:净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,工作台结构为开放式,但进行有害物质实验操作对操作者不利。超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度,符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级,用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L;空气流量应控制在0.75-1.0m3/s;细菌菌落数平均<1个,根据无菌状况必要时需要置换过滤器。
2. 显微镜
倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许,建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。
3. 培养箱
体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,一般最适生长温度为37℃,温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时,变不利于细胞生存,温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此,可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是最佳选择。
(1) 恒温培养箱:应选隔水式或晶体管式自控温培养箱,此类培养箱灵敏度高,温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜,其缺点是只宜于作密闭式培养。
(2) CO2培养箱:目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2(常用浓度为5%),易于稳定培养液pH,适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时,为使培养瓶内与外界保持通气状态,可将瓶盖略微旋松,为避免细胞被污染,使用这种培养方式时,培养箱内空气必须保持清洁,需定期用紫外线照射或酒精消毒,同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养液蒸发,保持箱内相对湿度在100%。
(3) 细胞培养耗材:培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。
4. 烘箱(干燥箱)
用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,烘箱内温度一般要达到160℃以上,通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至100℃时,停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门,以免骤冷导致玻璃器皿破裂,应等温度自然下降至100℃以下后可开门。
5. 水纯化装置
细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合,可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便,可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液*、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。
6. 冰箱
细胞培养实验室必备设备,应专用,不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质,且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。
普通冰箱:储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品,可短期保存组织样本。
-20℃低温冰箱、超低温冰箱:用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂,如酶、血清等。
7. 细胞冷冻储存器
储存器常用的液氮容器,根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素:容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度最低文帝可达-196℃,使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发,需注意观察剩余液氮量,及时补充,避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择,可配置有电子控制器的液氮储存器,实现冻存自动化;并可监测液氮水平和样品温度,确保样品温度始终处于设定温度点;可配置报警系统,设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警;同时具备热气体旁路系统,防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐,从而更有效地保护样品,防止容器内升温。另外,可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮,保证样品安全。
8. 离心机
细胞培养时,通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机;若要做细胞沉降,需要使用80-100G离心力,因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求,有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。
9. 天平
常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平:取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平;取样量100-10mg,选用精确度0.01mg的天平;取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准,可选择有自动校准功能的天平,方便维护。天平使用需要注意清洁,避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。答案来自
热心网友 时间:2023-10-28 08:12
细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术,细胞培养液的设计一直是细胞离体培养技术的关键。生物帮那里有文档细胞培养常用试剂的作用和准备方法。可以去看一下。 体外培养细胞使用的器材品种较多。由于离体细胞对各种毒物都很敏感,所以细胞培养所用器材的清洗、消毒处理是培养能否成功的关键之一。
一、玻璃器材
常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。
无论是初次使用还是培养后重复使用的玻璃器材均需要进行消毒处理。首次使用的玻璃器材应先用自来水初步刷洗,然后用稀盐酸溶液(1%)浸泡过夜,再用自来水冲洗,最后处理方法与重复使用的器皿的处理。
重复使用的玻璃器皿的处理步骤:
(1)刷洗。用软毛刷和优质中性洗涤剂刷洗,去除器皿内外表面的杂质。刷洗时注意不要用力过重,以防损坏器皿内表面光洁度,影响细胞生长;也不能留有死角。器皿数量大时,可使用超声波清洁装置,冲洗干净后晾干。
(2)清洁液处理。将刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重铬钾清洁液中。清洁液配方如下,见表3-1:
表3-1 清 洁 液 配 方
名 称清 洁 液 浓 度
25%(弱液)50%(次强液)75%(强液)
重铬酸钾1000g1000g1000g
浓 硫 酸2500mL5000mL7500ML
蒸馏水(或废液)7500Ml5000mL2500mL
该清洁液具有高度腐蚀性,操作时必须穿长筒胶靴,戴防酸橡皮手套,围裙和眼镜,以防清洁液溅出而灼伤。在配液时还需注意将酸缓慢放入水中,以防酸遇水放热产生酸溅出或使玻璃及陶制容器裂开而使清洁液外泄。切勿将水加入酸中,以防酸溅出。常用清洁液为75%和50%两种。
将玻璃器皿放入时最好装入塑料网袋内,再浸入清洁液中,玻璃瓶内不要残留气泡。一般浸泡12~24小时后取出。在清洁液中取出的器皿先用自来水冲洗10次以上,再用单蒸水冲洗三次以上,最后用双蒸水(或去离子水)冲洗1~2次,晾干,包装杀菌。一般用121℃磅高压蒸气灭菌20分钟。玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物,然后用单蒸水浸泡,除去滤板内堵塞杂物,若用滤膜则将滤膜丢弃,加4N盐酸浸泡12小时以上,用自来水冲洗,再用单蒸水抽滤2次,双蒸水(或去离子水)抽滤冲洗、包装、121℃高压蒸气灭菌20分钟。也可用5%洁消精浸泡20分钟后,再按上述方法冲洗和灭菌。
二、塑料器材
体外培养细胞中塑料器皿的使用越来越多,有进口的,也有国产的。主要有多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴。多孔培养板有4孔、6孔、24孔、96孔等规格可供选择。多数为进口产品,已消毒灭菌密封包装,使用时只需打开即可。
有一次性使用的,也有反复使用的。在我国不少实验室,由于经费有限,经过清洗和消毒灭菌再使用的较多。
塑料器皿若使用后,先用自来水浸泡冲洗、晾干,再用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,或先用2%NaOH处理之后再用3%HCl浸泡30分钟,最后用自来水冲洗干净,并用双蒸水冲洗3次以上,晾干。消毒采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防止产生划痕,以免影响细胞的贴附性。所以,培养要求较高的细胞的塑料器材,最好一次性使用。
三、橡皮器材
应选择质软、耐高温、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。新购置的橡皮制品,用自来水冲洗去除其表面粉粒和污物。先用5%氢氧化钠煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,再用4%盐酸煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,单蒸水冲洗3次,双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或置于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的橡皮制品,先用自来水冲洗干净,然后用洗衣粉加热煮沸10分钟后,用自来水边冲边用力搅动,以充分洗净残余洗衣粉,然后用蒸馏水煮沸2次,每次15分钟,再用单蒸水冲洗2次,必要时还要用双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或放于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
四、金属器材
细胞培养中需用多种金属器材,用于解剖、取材、剪切组织及持取物件等,常用的有剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等。新的金属器材,先用纸擦去表面的油脂,再用洗衣粉煮沸,或用1%碳酸氢钠煮沸15分钟,擦干后再用95%酒精纱布擦干,包装或置铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的金属器材,及时用酒精棉球擦干净,包装入铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
五、其他物品
纱布先用自来水洗净后,再用单蒸水冲洗,然后用单蒸水煮沸2次,每次15分钟,并经常用长镊子翻动,再用单蒸水洗2次,晾干后折成八层包装,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
注射器的针头使用后,立即用自来水(或来苏尔水)冲洗数次,冲洗出针头内的剩余物,以免堵塞针头,然后用单蒸水洗2~3次,再用95%酒精冲洗3次,包装或置铝饭盒内121℃高压蒸气灭菌20分钟。
用于细胞培养过程中的各种人工合成培养液、缓冲液和酶滤液等也需要进行除(灭)菌处理。缓冲液常用高压蒸气消毒。血清用56℃水浴灭活30分钟。人工合成培养液等酶溶液用过滤除菌。安装滤器时要防止滤膜装偏而导致过滤失效,过滤时力量不能过大、过猛,以免滤膜破裂。滤液量多,用抽滤式或加压式(正压式)过滤装置。滤液量少,可选用2.5cm直径的小号滤器,直接套在小瓶(如青霉素瓶)上,以注射器推动压力过滤。
消毒灭菌前所用的包装材料可用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制玻璃(或金属)消毒筒等,可根据器材大小、形态选用,采取局部包装或部分包装,并用线绳扎紧。
以上我只是简单的介绍一下,详细的信息可以去生物帮 www.bio1000.com/zt/cell/45828.html 那里看看,应该可以了解的。
热心网友 时间:2023-10-28 08:13
设施:超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。
器材:
一、玻璃器材 无菌室培养皿、滴流瓶、刻读吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头
五、其他物品
纱布、注射器和针头
来自百度百科
热心网友 时间:2023-10-28 08:13
细胞培养常用器材有一下几点:
一、玻璃器材
培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶;
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、细胞培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品做各种瓶或试管的塞子、盖子;
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头;
五、其他设备
倒置显微镜、电热鼓风干燥箱、电子天平、恒温水浴箱、离心机、压力蒸汽消毒器、液氮储存器;
此外,离心机的选择可以了解一下阿法拉伐的一次性连续流碟片离心机CultureOne™系列,可以帮助在分离过程中连续排出高浓度的细胞,提高离心液回收率和离心液透明度
CultureOne™系列适用于50L--2000L处理规模的一次性连续流离心机。即插即用的移动模块设计,无需工程配套,可在不同产线间灵活切换。全密闭下进料设计与固相连续带压排放,非常适合高固含量物料,保护细胞完整,得率高。无需进行CIP和SIP,缩短批次间切换时间,无蒸汽、水等工程配套,仅220V电源,无菌快速对接,占地面积仅1平米多,在不同生产线间灵活切换转移。
热心网友 时间:2023-10-28 08:12
1. 超净工作台
目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作,具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式(垂直式)和外流式(水平层流式)。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
(1) 侧流式工作台:空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向上流向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌,工作台结构为封闭式;
(2) 外流式工作台:净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,工作台结构为开放式,但进行有害物质实验操作对操作者不利。超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度,符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级,用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L;空气流量应控制在0.75-1.0m3/s;细菌菌落数平均<1个,根据无菌状况必要时需要置换过滤器。
2. 显微镜
倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许,建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。
3. 培养箱
体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,一般最适生长温度为37℃,温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时,变不利于细胞生存,温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此,可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是最佳选择。
(1) 恒温培养箱:应选隔水式或晶体管式自控温培养箱,此类培养箱灵敏度高,温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜,其缺点是只宜于作密闭式培养。
(2) CO2培养箱:目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2(常用浓度为5%),易于稳定培养液pH,适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时,为使培养瓶内与外界保持通气状态,可将瓶盖略微旋松,为避免细胞被污染,使用这种培养方式时,培养箱内空气必须保持清洁,需定期用紫外线照射或酒精消毒,同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养液蒸发,保持箱内相对湿度在100%。
(3) 细胞培养耗材:培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。
4. 烘箱(干燥箱)
用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,烘箱内温度一般要达到160℃以上,通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至100℃时,停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门,以免骤冷导致玻璃器皿破裂,应等温度自然下降至100℃以下后可开门。
5. 水纯化装置
细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合,可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便,可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液*、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。
6. 冰箱
细胞培养实验室必备设备,应专用,不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质,且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。
普通冰箱:储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品,可短期保存组织样本。
-20℃低温冰箱、超低温冰箱:用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂,如酶、血清等。
7. 细胞冷冻储存器
储存器常用的液氮容器,根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素:容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度最低文帝可达-196℃,使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发,需注意观察剩余液氮量,及时补充,避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择,可配置有电子控制器的液氮储存器,实现冻存自动化;并可监测液氮水平和样品温度,确保样品温度始终处于设定温度点;可配置报警系统,设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警;同时具备热气体旁路系统,防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐,从而更有效地保护样品,防止容器内升温。另外,可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮,保证样品安全。
8. 离心机
细胞培养时,通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机;若要做细胞沉降,需要使用80-100G离心力,因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求,有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。
9. 天平
常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平:取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平;取样量100-10mg,选用精确度0.01mg的天平;取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准,可选择有自动校准功能的天平,方便维护。天平使用需要注意清洁,避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。答案来自
热心网友 时间:2023-10-28 08:12
细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术,细胞培养液的设计一直是细胞离体培养技术的关键。生物帮那里有文档细胞培养常用试剂的作用和准备方法。可以去看一下。 体外培养细胞使用的器材品种较多。由于离体细胞对各种毒物都很敏感,所以细胞培养所用器材的清洗、消毒处理是培养能否成功的关键之一。
一、玻璃器材
常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。
无论是初次使用还是培养后重复使用的玻璃器材均需要进行消毒处理。首次使用的玻璃器材应先用自来水初步刷洗,然后用稀盐酸溶液(1%)浸泡过夜,再用自来水冲洗,最后处理方法与重复使用的器皿的处理。
重复使用的玻璃器皿的处理步骤:
(1)刷洗。用软毛刷和优质中性洗涤剂刷洗,去除器皿内外表面的杂质。刷洗时注意不要用力过重,以防损坏器皿内表面光洁度,影响细胞生长;也不能留有死角。器皿数量大时,可使用超声波清洁装置,冲洗干净后晾干。
(2)清洁液处理。将刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重铬钾清洁液中。清洁液配方如下,见表3-1:
表3-1 清 洁 液 配 方
名 称清 洁 液 浓 度
25%(弱液)50%(次强液)75%(强液)
重铬酸钾1000g1000g1000g
浓 硫 酸2500mL5000mL7500ML
蒸馏水(或废液)7500Ml5000mL2500mL
该清洁液具有高度腐蚀性,操作时必须穿长筒胶靴,戴防酸橡皮手套,围裙和眼镜,以防清洁液溅出而灼伤。在配液时还需注意将酸缓慢放入水中,以防酸遇水放热产生酸溅出或使玻璃及陶制容器裂开而使清洁液外泄。切勿将水加入酸中,以防酸溅出。常用清洁液为75%和50%两种。
将玻璃器皿放入时最好装入塑料网袋内,再浸入清洁液中,玻璃瓶内不要残留气泡。一般浸泡12~24小时后取出。在清洁液中取出的器皿先用自来水冲洗10次以上,再用单蒸水冲洗三次以上,最后用双蒸水(或去离子水)冲洗1~2次,晾干,包装杀菌。一般用121℃磅高压蒸气灭菌20分钟。玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物,然后用单蒸水浸泡,除去滤板内堵塞杂物,若用滤膜则将滤膜丢弃,加4N盐酸浸泡12小时以上,用自来水冲洗,再用单蒸水抽滤2次,双蒸水(或去离子水)抽滤冲洗、包装、121℃高压蒸气灭菌20分钟。也可用5%洁消精浸泡20分钟后,再按上述方法冲洗和灭菌。
二、塑料器材
体外培养细胞中塑料器皿的使用越来越多,有进口的,也有国产的。主要有多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴。多孔培养板有4孔、6孔、24孔、96孔等规格可供选择。多数为进口产品,已消毒灭菌密封包装,使用时只需打开即可。
有一次性使用的,也有反复使用的。在我国不少实验室,由于经费有限,经过清洗和消毒灭菌再使用的较多。
塑料器皿若使用后,先用自来水浸泡冲洗、晾干,再用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,或先用2%NaOH处理之后再用3%HCl浸泡30分钟,最后用自来水冲洗干净,并用双蒸水冲洗3次以上,晾干。消毒采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防止产生划痕,以免影响细胞的贴附性。所以,培养要求较高的细胞的塑料器材,最好一次性使用。
三、橡皮器材
应选择质软、耐高温、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。新购置的橡皮制品,用自来水冲洗去除其表面粉粒和污物。先用5%氢氧化钠煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,再用4%盐酸煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,单蒸水冲洗3次,双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或置于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的橡皮制品,先用自来水冲洗干净,然后用洗衣粉加热煮沸10分钟后,用自来水边冲边用力搅动,以充分洗净残余洗衣粉,然后用蒸馏水煮沸2次,每次15分钟,再用单蒸水冲洗2次,必要时还要用双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或放于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
四、金属器材
细胞培养中需用多种金属器材,用于解剖、取材、剪切组织及持取物件等,常用的有剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等。新的金属器材,先用纸擦去表面的油脂,再用洗衣粉煮沸,或用1%碳酸氢钠煮沸15分钟,擦干后再用95%酒精纱布擦干,包装或置铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的金属器材,及时用酒精棉球擦干净,包装入铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
五、其他物品
纱布先用自来水洗净后,再用单蒸水冲洗,然后用单蒸水煮沸2次,每次15分钟,并经常用长镊子翻动,再用单蒸水洗2次,晾干后折成八层包装,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
注射器的针头使用后,立即用自来水(或来苏尔水)冲洗数次,冲洗出针头内的剩余物,以免堵塞针头,然后用单蒸水洗2~3次,再用95%酒精冲洗3次,包装或置铝饭盒内121℃高压蒸气灭菌20分钟。
用于细胞培养过程中的各种人工合成培养液、缓冲液和酶滤液等也需要进行除(灭)菌处理。缓冲液常用高压蒸气消毒。血清用56℃水浴灭活30分钟。人工合成培养液等酶溶液用过滤除菌。安装滤器时要防止滤膜装偏而导致过滤失效,过滤时力量不能过大、过猛,以免滤膜破裂。滤液量多,用抽滤式或加压式(正压式)过滤装置。滤液量少,可选用2.5cm直径的小号滤器,直接套在小瓶(如青霉素瓶)上,以注射器推动压力过滤。
消毒灭菌前所用的包装材料可用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制玻璃(或金属)消毒筒等,可根据器材大小、形态选用,采取局部包装或部分包装,并用线绳扎紧。
以上我只是简单的介绍一下,详细的信息可以去生物帮 www.bio1000.com/zt/cell/45828.html 那里看看,应该可以了解的。
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设施:超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。
器材:
一、玻璃器材 无菌室培养皿、滴流瓶、刻读吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头
五、其他物品
纱布、注射器和针头
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细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术,细胞培养液的设计一直是细胞离体培养技术的关键。生物帮那里有文档细胞培养常用试剂的作用和准备方法。可以去看一下。 体外培养细胞使用的器材品种较多。由于离体细胞对各种毒物都很敏感,所以细胞培养所用器材的清洗、消毒处理是培养能否成功的关键之一。
一、玻璃器材
常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。
无论是初次使用还是培养后重复使用的玻璃器材均需要进行消毒处理。首次使用的玻璃器材应先用自来水初步刷洗,然后用稀盐酸溶液(1%)浸泡过夜,再用自来水冲洗,最后处理方法与重复使用的器皿的处理。
重复使用的玻璃器皿的处理步骤:
(1)刷洗。用软毛刷和优质中性洗涤剂刷洗,去除器皿内外表面的杂质。刷洗时注意不要用力过重,以防损坏器皿内表面光洁度,影响细胞生长;也不能留有死角。器皿数量大时,可使用超声波清洁装置,冲洗干净后晾干。
(2)清洁液处理。将刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重铬钾清洁液中。清洁液配方如下,见表3-1:
表3-1 清 洁 液 配 方
名 称清 洁 液 浓 度
25%(弱液)50%(次强液)75%(强液)
重铬酸钾1000g1000g1000g
浓 硫 酸2500mL5000mL7500ML
蒸馏水(或废液)7500Ml5000mL2500mL
该清洁液具有高度腐蚀性,操作时必须穿长筒胶靴,戴防酸橡皮手套,围裙和眼镜,以防清洁液溅出而灼伤。在配液时还需注意将酸缓慢放入水中,以防酸遇水放热产生酸溅出或使玻璃及陶制容器裂开而使清洁液外泄。切勿将水加入酸中,以防酸溅出。常用清洁液为75%和50%两种。
将玻璃器皿放入时最好装入塑料网袋内,再浸入清洁液中,玻璃瓶内不要残留气泡。一般浸泡12~24小时后取出。在清洁液中取出的器皿先用自来水冲洗10次以上,再用单蒸水冲洗三次以上,最后用双蒸水(或去离子水)冲洗1~2次,晾干,包装杀菌。一般用121℃磅高压蒸气灭菌20分钟。玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物,然后用单蒸水浸泡,除去滤板内堵塞杂物,若用滤膜则将滤膜丢弃,加4N盐酸浸泡12小时以上,用自来水冲洗,再用单蒸水抽滤2次,双蒸水(或去离子水)抽滤冲洗、包装、121℃高压蒸气灭菌20分钟。也可用5%洁消精浸泡20分钟后,再按上述方法冲洗和灭菌。
二、塑料器材
体外培养细胞中塑料器皿的使用越来越多,有进口的,也有国产的。主要有多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴。多孔培养板有4孔、6孔、24孔、96孔等规格可供选择。多数为进口产品,已消毒灭菌密封包装,使用时只需打开即可。
有一次性使用的,也有反复使用的。在我国不少实验室,由于经费有限,经过清洗和消毒灭菌再使用的较多。
塑料器皿若使用后,先用自来水浸泡冲洗、晾干,再用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,或先用2%NaOH处理之后再用3%HCl浸泡30分钟,最后用自来水冲洗干净,并用双蒸水冲洗3次以上,晾干。消毒采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防止产生划痕,以免影响细胞的贴附性。所以,培养要求较高的细胞的塑料器材,最好一次性使用。
三、橡皮器材
应选择质软、耐高温、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。新购置的橡皮制品,用自来水冲洗去除其表面粉粒和污物。先用5%氢氧化钠煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,再用4%盐酸煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,单蒸水冲洗3次,双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或置于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的橡皮制品,先用自来水冲洗干净,然后用洗衣粉加热煮沸10分钟后,用自来水边冲边用力搅动,以充分洗净残余洗衣粉,然后用蒸馏水煮沸2次,每次15分钟,再用单蒸水冲洗2次,必要时还要用双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或放于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
四、金属器材
细胞培养中需用多种金属器材,用于解剖、取材、剪切组织及持取物件等,常用的有剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等。新的金属器材,先用纸擦去表面的油脂,再用洗衣粉煮沸,或用1%碳酸氢钠煮沸15分钟,擦干后再用95%酒精纱布擦干,包装或置铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的金属器材,及时用酒精棉球擦干净,包装入铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
五、其他物品
纱布先用自来水洗净后,再用单蒸水冲洗,然后用单蒸水煮沸2次,每次15分钟,并经常用长镊子翻动,再用单蒸水洗2次,晾干后折成八层包装,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
注射器的针头使用后,立即用自来水(或来苏尔水)冲洗数次,冲洗出针头内的剩余物,以免堵塞针头,然后用单蒸水洗2~3次,再用95%酒精冲洗3次,包装或置铝饭盒内121℃高压蒸气灭菌20分钟。
用于细胞培养过程中的各种人工合成培养液、缓冲液和酶滤液等也需要进行除(灭)菌处理。缓冲液常用高压蒸气消毒。血清用56℃水浴灭活30分钟。人工合成培养液等酶溶液用过滤除菌。安装滤器时要防止滤膜装偏而导致过滤失效,过滤时力量不能过大、过猛,以免滤膜破裂。滤液量多,用抽滤式或加压式(正压式)过滤装置。滤液量少,可选用2.5cm直径的小号滤器,直接套在小瓶(如青霉素瓶)上,以注射器推动压力过滤。
消毒灭菌前所用的包装材料可用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制玻璃(或金属)消毒筒等,可根据器材大小、形态选用,采取局部包装或部分包装,并用线绳扎紧。
以上我只是简单的介绍一下,详细的信息可以去生物帮 www.bio1000.com/zt/cell/45828.html 那里看看,应该可以了解的。
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1. 超净工作台
目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作,具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式(垂直式)和外流式(水平层流式)。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
(1) 侧流式工作台:空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向上流向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌,工作台结构为封闭式;
(2) 外流式工作台:净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,工作台结构为开放式,但进行有害物质实验操作对操作者不利。超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度,符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级,用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L;空气流量应控制在0.75-1.0m3/s;细菌菌落数平均<1个,根据无菌状况必要时需要置换过滤器。
2. 显微镜
倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许,建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。
3. 培养箱
体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,一般最适生长温度为37℃,温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时,变不利于细胞生存,温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此,可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是最佳选择。
(1) 恒温培养箱:应选隔水式或晶体管式自控温培养箱,此类培养箱灵敏度高,温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜,其缺点是只宜于作密闭式培养。
(2) CO2培养箱:目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2(常用浓度为5%),易于稳定培养液pH,适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时,为使培养瓶内与外界保持通气状态,可将瓶盖略微旋松,为避免细胞被污染,使用这种培养方式时,培养箱内空气必须保持清洁,需定期用紫外线照射或酒精消毒,同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养液蒸发,保持箱内相对湿度在100%。
(3) 细胞培养耗材:培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。
4. 烘箱(干燥箱)
用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,烘箱内温度一般要达到160℃以上,通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至100℃时,停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门,以免骤冷导致玻璃器皿破裂,应等温度自然下降至100℃以下后可开门。
5. 水纯化装置
细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合,可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便,可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液*、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。
6. 冰箱
细胞培养实验室必备设备,应专用,不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质,且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。
普通冰箱:储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品,可短期保存组织样本。
-20℃低温冰箱、超低温冰箱:用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂,如酶、血清等。
7. 细胞冷冻储存器
储存器常用的液氮容器,根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素:容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度最低文帝可达-196℃,使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发,需注意观察剩余液氮量,及时补充,避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择,可配置有电子控制器的液氮储存器,实现冻存自动化;并可监测液氮水平和样品温度,确保样品温度始终处于设定温度点;可配置报警系统,设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警;同时具备热气体旁路系统,防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐,从而更有效地保护样品,防止容器内升温。另外,可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮,保证样品安全。
8. 离心机
细胞培养时,通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机;若要做细胞沉降,需要使用80-100G离心力,因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求,有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。
9. 天平
常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平:取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平;取样量100-10mg,选用精确度0.01mg的天平;取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准,可选择有自动校准功能的天平,方便维护。天平使用需要注意清洁,避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。答案来自
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细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术,细胞培养液的设计一直是细胞离体培养技术的关键。生物帮那里有文档细胞培养常用试剂的作用和准备方法。可以去看一下。 体外培养细胞使用的器材品种较多。由于离体细胞对各种毒物都很敏感,所以细胞培养所用器材的清洗、消毒处理是培养能否成功的关键之一。
一、玻璃器材
常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。
无论是初次使用还是培养后重复使用的玻璃器材均需要进行消毒处理。首次使用的玻璃器材应先用自来水初步刷洗,然后用稀盐酸溶液(1%)浸泡过夜,再用自来水冲洗,最后处理方法与重复使用的器皿的处理。
重复使用的玻璃器皿的处理步骤:
(1)刷洗。用软毛刷和优质中性洗涤剂刷洗,去除器皿内外表面的杂质。刷洗时注意不要用力过重,以防损坏器皿内表面光洁度,影响细胞生长;也不能留有死角。器皿数量大时,可使用超声波清洁装置,冲洗干净后晾干。
(2)清洁液处理。将刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重铬钾清洁液中。清洁液配方如下,见表3-1:
表3-1 清 洁 液 配 方
名 称清 洁 液 浓 度
25%(弱液)50%(次强液)75%(强液)
重铬酸钾1000g1000g1000g
浓 硫 酸2500mL5000mL7500ML
蒸馏水(或废液)7500Ml5000mL2500mL
该清洁液具有高度腐蚀性,操作时必须穿长筒胶靴,戴防酸橡皮手套,围裙和眼镜,以防清洁液溅出而灼伤。在配液时还需注意将酸缓慢放入水中,以防酸遇水放热产生酸溅出或使玻璃及陶制容器裂开而使清洁液外泄。切勿将水加入酸中,以防酸溅出。常用清洁液为75%和50%两种。
将玻璃器皿放入时最好装入塑料网袋内,再浸入清洁液中,玻璃瓶内不要残留气泡。一般浸泡12~24小时后取出。在清洁液中取出的器皿先用自来水冲洗10次以上,再用单蒸水冲洗三次以上,最后用双蒸水(或去离子水)冲洗1~2次,晾干,包装杀菌。一般用121℃磅高压蒸气灭菌20分钟。玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物,然后用单蒸水浸泡,除去滤板内堵塞杂物,若用滤膜则将滤膜丢弃,加4N盐酸浸泡12小时以上,用自来水冲洗,再用单蒸水抽滤2次,双蒸水(或去离子水)抽滤冲洗、包装、121℃高压蒸气灭菌20分钟。也可用5%洁消精浸泡20分钟后,再按上述方法冲洗和灭菌。
二、塑料器材
体外培养细胞中塑料器皿的使用越来越多,有进口的,也有国产的。主要有多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴。多孔培养板有4孔、6孔、24孔、96孔等规格可供选择。多数为进口产品,已消毒灭菌密封包装,使用时只需打开即可。
有一次性使用的,也有反复使用的。在我国不少实验室,由于经费有限,经过清洗和消毒灭菌再使用的较多。
塑料器皿若使用后,先用自来水浸泡冲洗、晾干,再用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,或先用2%NaOH处理之后再用3%HCl浸泡30分钟,最后用自来水冲洗干净,并用双蒸水冲洗3次以上,晾干。消毒采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防止产生划痕,以免影响细胞的贴附性。所以,培养要求较高的细胞的塑料器材,最好一次性使用。
三、橡皮器材
应选择质软、耐高温、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。新购置的橡皮制品,用自来水冲洗去除其表面粉粒和污物。先用5%氢氧化钠煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,再用4%盐酸煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,单蒸水冲洗3次,双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或置于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的橡皮制品,先用自来水冲洗干净,然后用洗衣粉加热煮沸10分钟后,用自来水边冲边用力搅动,以充分洗净残余洗衣粉,然后用蒸馏水煮沸2次,每次15分钟,再用单蒸水冲洗2次,必要时还要用双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或放于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
四、金属器材
细胞培养中需用多种金属器材,用于解剖、取材、剪切组织及持取物件等,常用的有剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等。新的金属器材,先用纸擦去表面的油脂,再用洗衣粉煮沸,或用1%碳酸氢钠煮沸15分钟,擦干后再用95%酒精纱布擦干,包装或置铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的金属器材,及时用酒精棉球擦干净,包装入铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
五、其他物品
纱布先用自来水洗净后,再用单蒸水冲洗,然后用单蒸水煮沸2次,每次15分钟,并经常用长镊子翻动,再用单蒸水洗2次,晾干后折成八层包装,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
注射器的针头使用后,立即用自来水(或来苏尔水)冲洗数次,冲洗出针头内的剩余物,以免堵塞针头,然后用单蒸水洗2~3次,再用95%酒精冲洗3次,包装或置铝饭盒内121℃高压蒸气灭菌20分钟。
用于细胞培养过程中的各种人工合成培养液、缓冲液和酶滤液等也需要进行除(灭)菌处理。缓冲液常用高压蒸气消毒。血清用56℃水浴灭活30分钟。人工合成培养液等酶溶液用过滤除菌。安装滤器时要防止滤膜装偏而导致过滤失效,过滤时力量不能过大、过猛,以免滤膜破裂。滤液量多,用抽滤式或加压式(正压式)过滤装置。滤液量少,可选用2.5cm直径的小号滤器,直接套在小瓶(如青霉素瓶)上,以注射器推动压力过滤。
消毒灭菌前所用的包装材料可用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制玻璃(或金属)消毒筒等,可根据器材大小、形态选用,采取局部包装或部分包装,并用线绳扎紧。
以上我只是简单的介绍一下,详细的信息可以去生物帮 www.bio1000.com/zt/cell/45828.html 那里看看,应该可以了解的。
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设施:超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。
器材:
一、玻璃器材 无菌室培养皿、滴流瓶、刻读吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头
五、其他物品
纱布、注射器和针头
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细胞培养常用器材有一下几点:
一、玻璃器材
培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶;
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、细胞培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品做各种瓶或试管的塞子、盖子;
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头;
五、其他设备
倒置显微镜、电热鼓风干燥箱、电子天平、恒温水浴箱、离心机、压力蒸汽消毒器、液氮储存器;
此外,离心机的选择可以了解一下阿法拉伐的一次性连续流碟片离心机CultureOne™系列,可以帮助在分离过程中连续排出高浓度的细胞,提高离心液回收率和离心液透明度
CultureOne™系列适用于50L--2000L处理规模的一次性连续流离心机。即插即用的移动模块设计,无需工程配套,可在不同产线间灵活切换。全密闭下进料设计与固相连续带压排放,非常适合高固含量物料,保护细胞完整,得率高。无需进行CIP和SIP,缩短批次间切换时间,无蒸汽、水等工程配套,仅220V电源,无菌快速对接,占地面积仅1平米多,在不同生产线间灵活切换转移。
热心网友 时间:2023-10-28 08:13
设施:超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。
器材:
一、玻璃器材 无菌室培养皿、滴流瓶、刻读吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头
五、其他物品
纱布、注射器和针头
来自百度百科
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细胞培养常用器材有一下几点:
一、玻璃器材
培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶;
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、细胞培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品做各种瓶或试管的塞子、盖子;
四、金属器材
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细胞培养常用器材有一下几点:
一、玻璃器材
培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶;
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、细胞培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品做各种瓶或试管的塞子、盖子;
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头;
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1. 超净工作台
目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作,具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式(垂直式)和外流式(水平层流式)。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
(1) 侧流式工作台:空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向上流向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌,工作台结构为封闭式;
(2) 外流式工作台:净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,工作台结构为开放式,但进行有害物质实验操作对操作者不利。超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度,符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级,用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L;空气流量应控制在0.75-1.0m3/s;细菌菌落数平均<1个,根据无菌状况必要时需要置换过滤器。
2. 显微镜
倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许,建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。
3. 培养箱
体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,一般最适生长温度为37℃,温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时,变不利于细胞生存,温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此,可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是最佳选择。
(1) 恒温培养箱:应选隔水式或晶体管式自控温培养箱,此类培养箱灵敏度高,温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜,其缺点是只宜于作密闭式培养。
(2) CO2培养箱:目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2(常用浓度为5%),易于稳定培养液pH,适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时,为使培养瓶内与外界保持通气状态,可将瓶盖略微旋松,为避免细胞被污染,使用这种培养方式时,培养箱内空气必须保持清洁,需定期用紫外线照射或酒精消毒,同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养液蒸发,保持箱内相对湿度在100%。
(3) 细胞培养耗材:培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。
4. 烘箱(干燥箱)
用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,烘箱内温度一般要达到160℃以上,通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至100℃时,停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门,以免骤冷导致玻璃器皿破裂,应等温度自然下降至100℃以下后可开门。
5. 水纯化装置
细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合,可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便,可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液*、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。
6. 冰箱
细胞培养实验室必备设备,应专用,不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质,且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。
普通冰箱:储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品,可短期保存组织样本。
-20℃低温冰箱、超低温冰箱:用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂,如酶、血清等。
7. 细胞冷冻储存器
储存器常用的液氮容器,根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素:容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度最低文帝可达-196℃,使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发,需注意观察剩余液氮量,及时补充,避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择,可配置有电子控制器的液氮储存器,实现冻存自动化;并可监测液氮水平和样品温度,确保样品温度始终处于设定温度点;可配置报警系统,设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警;同时具备热气体旁路系统,防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐,从而更有效地保护样品,防止容器内升温。另外,可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮,保证样品安全。
8. 离心机
细胞培养时,通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机;若要做细胞沉降,需要使用80-100G离心力,因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求,有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。
9. 天平
常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平:取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平;取样量100-10mg,选用精确度0.01mg的天平;取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准,可选择有自动校准功能的天平,方便维护。天平使用需要注意清洁,避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。答案来自
热心网友 时间:2023-10-28 08:12
细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术,细胞培养液的设计一直是细胞离体培养技术的关键。生物帮那里有文档细胞培养常用试剂的作用和准备方法。可以去看一下。 体外培养细胞使用的器材品种较多。由于离体细胞对各种毒物都很敏感,所以细胞培养所用器材的清洗、消毒处理是培养能否成功的关键之一。
一、玻璃器材
常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。
无论是初次使用还是培养后重复使用的玻璃器材均需要进行消毒处理。首次使用的玻璃器材应先用自来水初步刷洗,然后用稀盐酸溶液(1%)浸泡过夜,再用自来水冲洗,最后处理方法与重复使用的器皿的处理。
重复使用的玻璃器皿的处理步骤:
(1)刷洗。用软毛刷和优质中性洗涤剂刷洗,去除器皿内外表面的杂质。刷洗时注意不要用力过重,以防损坏器皿内表面光洁度,影响细胞生长;也不能留有死角。器皿数量大时,可使用超声波清洁装置,冲洗干净后晾干。
(2)清洁液处理。将刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重铬钾清洁液中。清洁液配方如下,见表3-1:
表3-1 清 洁 液 配 方
名 称清 洁 液 浓 度
25%(弱液)50%(次强液)75%(强液)
重铬酸钾1000g1000g1000g
浓 硫 酸2500mL5000mL7500ML
蒸馏水(或废液)7500Ml5000mL2500mL
该清洁液具有高度腐蚀性,操作时必须穿长筒胶靴,戴防酸橡皮手套,围裙和眼镜,以防清洁液溅出而灼伤。在配液时还需注意将酸缓慢放入水中,以防酸遇水放热产生酸溅出或使玻璃及陶制容器裂开而使清洁液外泄。切勿将水加入酸中,以防酸溅出。常用清洁液为75%和50%两种。
将玻璃器皿放入时最好装入塑料网袋内,再浸入清洁液中,玻璃瓶内不要残留气泡。一般浸泡12~24小时后取出。在清洁液中取出的器皿先用自来水冲洗10次以上,再用单蒸水冲洗三次以上,最后用双蒸水(或去离子水)冲洗1~2次,晾干,包装杀菌。一般用121℃磅高压蒸气灭菌20分钟。玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物,然后用单蒸水浸泡,除去滤板内堵塞杂物,若用滤膜则将滤膜丢弃,加4N盐酸浸泡12小时以上,用自来水冲洗,再用单蒸水抽滤2次,双蒸水(或去离子水)抽滤冲洗、包装、121℃高压蒸气灭菌20分钟。也可用5%洁消精浸泡20分钟后,再按上述方法冲洗和灭菌。
二、塑料器材
体外培养细胞中塑料器皿的使用越来越多,有进口的,也有国产的。主要有多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴。多孔培养板有4孔、6孔、24孔、96孔等规格可供选择。多数为进口产品,已消毒灭菌密封包装,使用时只需打开即可。
有一次性使用的,也有反复使用的。在我国不少实验室,由于经费有限,经过清洗和消毒灭菌再使用的较多。
塑料器皿若使用后,先用自来水浸泡冲洗、晾干,再用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,或先用2%NaOH处理之后再用3%HCl浸泡30分钟,最后用自来水冲洗干净,并用双蒸水冲洗3次以上,晾干。消毒采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防止产生划痕,以免影响细胞的贴附性。所以,培养要求较高的细胞的塑料器材,最好一次性使用。
三、橡皮器材
应选择质软、耐高温、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。新购置的橡皮制品,用自来水冲洗去除其表面粉粒和污物。先用5%氢氧化钠煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,再用4%盐酸煮沸15分钟,用自来水冲洗8次,单蒸水冲洗3次,双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或置于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的橡皮制品,先用自来水冲洗干净,然后用洗衣粉加热煮沸10分钟后,用自来水边冲边用力搅动,以充分洗净残余洗衣粉,然后用蒸馏水煮沸2次,每次15分钟,再用单蒸水冲洗2次,必要时还要用双蒸水(或去离子水)冲洗一次,晾干后包装或放于铝盒内,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
四、金属器材
细胞培养中需用多种金属器材,用于解剖、取材、剪切组织及持取物件等,常用的有剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等。新的金属器材,先用纸擦去表面的油脂,再用洗衣粉煮沸,或用1%碳酸氢钠煮沸15分钟,擦干后再用95%酒精纱布擦干,包装或置铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
已用过的金属器材,及时用酒精棉球擦干净,包装入铝盒内于121℃高压蒸气灭菌20分钟。
五、其他物品
纱布先用自来水洗净后,再用单蒸水冲洗,然后用单蒸水煮沸2次,每次15分钟,并经常用长镊子翻动,再用单蒸水洗2次,晾干后折成八层包装,用121℃高压蒸气灭菌20分钟。
注射器的针头使用后,立即用自来水(或来苏尔水)冲洗数次,冲洗出针头内的剩余物,以免堵塞针头,然后用单蒸水洗2~3次,再用95%酒精冲洗3次,包装或置铝饭盒内121℃高压蒸气灭菌20分钟。
用于细胞培养过程中的各种人工合成培养液、缓冲液和酶滤液等也需要进行除(灭)菌处理。缓冲液常用高压蒸气消毒。血清用56℃水浴灭活30分钟。人工合成培养液等酶溶液用过滤除菌。安装滤器时要防止滤膜装偏而导致过滤失效,过滤时力量不能过大、过猛,以免滤膜破裂。滤液量多,用抽滤式或加压式(正压式)过滤装置。滤液量少,可选用2.5cm直径的小号滤器,直接套在小瓶(如青霉素瓶)上,以注射器推动压力过滤。
消毒灭菌前所用的包装材料可用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒和特制玻璃(或金属)消毒筒等,可根据器材大小、形态选用,采取局部包装或部分包装,并用线绳扎紧。
以上我只是简单的介绍一下,详细的信息可以去生物帮 www.bio1000.com/zt/cell/45828.html 那里看看,应该可以了解的。
热心网友 时间:2023-10-28 08:13
设施:超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。
器材:
一、玻璃器材 无菌室培养皿、滴流瓶、刻读吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头
五、其他物品
纱布、注射器和针头
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细胞培养常用器材有一下几点:
一、玻璃器材
培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶;
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、细胞培养瓶
三、橡皮器材
橡皮制品做各种瓶或试管的塞子、盖子;
四、金属器材
剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头;
五、其他设备
倒置显微镜、电热鼓风干燥箱、电子天平、恒温水浴箱、离心机、压力蒸汽消毒器、液氮储存器;
此外,离心机的选择可以了解一下阿法拉伐的一次性连续流碟片离心机CultureOne™系列,可以帮助在分离过程中连续排出高浓度的细胞,提高离心液回收率和离心液透明度
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