配细胞冻存液
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热心网友
细胞冻存
1.预先配制冻存液：10
%
dmso
+
90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用*小心吸去培养板中的培养基,pbs冲洗两次,用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐）最好；或者可以在4℃,2h；然后转到-20℃,2h；-80℃,2h；放入液氮罐.
这是我实验中用的protocol,
热心网友
必须先离心的再依次加保护液，不过我没试过把细胞直接放配好的冻存液了，估计不得行，动物细胞很脆弱的，嘎嘎
