质粒线性化的目的
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发布时间：2022-04-22 09:03
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时间：2023-07-02 05:44
质粒线性化的目的：主要是为了引进目的DNA。载体的主要任务就是携带目的DNA进入宿主细胞中。如果载体一直都是环状的，则目的DNA不能加载到载体上了。
pET28a/HindIII、pET28b/HindIII在电泳图上处于同一水平线，pET28a和pET28b应该是相同分子量；pET28a比pET28a/HindIII慢，应是所说的例外情况，可能与构象有关；pET28a/HindIII与pET28a、pET28b/HindIII与pET28b不在同一位置，说明单酶切已切开。
转录模板必须满足：
1、在基因组全长克隆过程中，在正向引物5‘末端添加T7启动子序列。
2、以T7启动子作为体外转录启动子，在启动子后面靶位序列连续带有3个G，转录效率最高。
3、在正向引物5/端添加一个帽子G，有利于提高体外转录RNA分子的侵染活性。
以上内容参考：百度百科-体外转录
