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进行质谱参数优化
(1)配制相应化合物标准品溶液(尽可能使用单标,如无单标则需保证没有产生相同母离子子离子对的化合物存在): 配制浓度: 1ppm左右(浓度过大或过小均会影响优化结果)
(2)使用流动注射方式进行优化: 不连接色谱柱, 使用两通连接管路.
液相条件:
流动相 甲醇或乙腈: 水=1:1 (根据实际情况选择合适的流动相及比例)
流速: 0.15ml/min
液相停止时间:1min
(3)开始MRM优化过程
点击实时分析窗口-Method标签,选择Optimization for Method 选项
选择 Search proct ion and optimize MRM
在下表中编辑优化内容:选择Check for Precursor,Adjust Precursor以及Optimize Voltage三项;输入化合物名称,母离子质荷比(Precursor m/z), 选择相应+/-模式,输入起止时间(与LC停止时间一致:1min);选择输出文件夹位置(Output); 开始执行优化(Start)
(4)得到质谱参数优化结果: 选择相应的定性离子以及定量离子,保存方法
3 连接色谱柱,优化液相方法,确认液相分离方法,保存该方法。
4 确认各个化合物保留时间
打开Postrun窗口
在Postrun窗口打开经液相分离的数据
将化合物表切换至Edit模式,选择Ret.Time标签
鼠标点击相应目标化合物谱峰,自动添加保留时间
切换至View模式,保存方法。
5 优化分组
打开实时分析窗口,调用确认保留时间后的方法。
选择实时分析窗口-方法标签-Update MRM event time by compound table, 则MRM运行时 间自动根据化合物表中的保留时间自动进行调整
结果如下所示:
如需对监测时间进行修改,则选择Method菜单的Data Processing Parameters[MS]标签
选择Identification 标签,对Process Time 进行修改,如下图所示
再进行更新(Method标签-Update MRM event time by compound table),则相应监测时间发生变化,如下图所示(根据样品实际情况,选择合适的监测时间窗口)
备注:如需添加其它MRM方法,选择Method-Add MRM event
添加相应方法即可
6建立方法,进行相关其它试验。
编辑批处理表,采集样品数据。
7 在Broswer窗口中制作工作曲线。
打开Broswer窗口
将数据添加至该窗口中:
设置合理积分参数,使目标谱峰被积分、识别。
将Method View窗口切换至Edit状态,切换至Integration标签,选择合理积分参数
选择 Peak Integration for All data
在Chromatogram view察看结果
在Method-View-Compund table添加已知标准品浓度,切换至View
在Quantative Results View中选择相应的Sample Type和Level#
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Lcms分析方法建立的过程,就是按照正常的逻辑性分析步骤操作。
逻辑性的操作就是要从最基础的分析步骤,然后按照逻辑思维加大难度。