做多态性分析时,想做PCR-RFLP,引物设计后怎么确定酶切位点?
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看你的试验目的是什么.加入酶切位点一般是要做克隆构建载体用的,在引物的末端引入酶切位点,这样PCR产物带上了对应的位点,通过酶切与相应的酶切载体连接.如果只是检测或者用不到酶切位点,当然就不需要加了.
一般的PCR的引物是不需要加酶切位点的，保护碱基是在需要加酶切位点的引物上加入的，加入保护碱基的目的就是为了使PCR产物在后续的实验过程中能够更有效的进行切割，当然有个别的内切酶不需要保护碱基就可以有效切割，但是一般的都需要加保护碱基，不同的内切酶需要的保护碱基的个数和种类也不同。
