食品中亚硝酸盐的测定

食品中亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺分光光度法） 一、实验目的 1.明确亚硝酸盐在食品中的作用以及限量标准。 二、实验原理 样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺 酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，与标准系列比较 定量。 三、仪器 1. 722分光光度计 2. 组织绞碎机，菜刀，砧板 3. 50mL烧杯 500mL烧杯 3L大烧杯 4. 电炉 5. 托盘天平 6. 200mL容量瓶 500mL容量瓶 7. 恒温水浴锅 8. 25mL具塞比色管 9. 滴管，漏斗，滤纸，吸小球， 10. 玻璃棒，温度计，标记笔，标签纸 若干，提前20min打开预热 1-2套 2个/组 1个/组 2个 2个 1个/组 1个 1个/组 1-2个 10个/组 1个/组 若干 2.掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项 四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。） 1.亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾分装，1瓶/大[K4Fe6(CN)·3H2O]，用水溶解后，稀释至1000mL。 组 2．乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌[Zn(CH3C00)2·2H20]，分装，1瓶/大加3 mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL。 溶于100 mL热水中，冷却后备用。 组 组 4、对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称取0.4 g对氨基苯磺酸，分装，1瓶/大溶于100 mL 20％的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保组 3、饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠(Na2B07·10H20)，分装，1瓶/大存。 胺，溶于100毫升水中，避光保存。有致癌作用 组 1瓶/组 5、盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2克盐酸萘乙二分装，1瓶/大6、亚硝酸钠标准溶液（0.2g/L）：精密称取0.1000g于 硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入分装，1瓶/大500ml容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每ml相当于组 200µg亚硝酸钠。 7、亚硝酸钠标准使用液（0.2µg/mL）：临用前，吸取 亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，分装，1瓶/大加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸组 钠。 8. 蒸馏水 五、实验步骤 1、样品的处理： （1）取样：取适量的火腿肠，放入搅碎机内搅碎。准确称取5.0克经 绞碎、混匀的样品，置于50毫升烧杯中。 （2）沉淀蛋白质： ①加12.5mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将 样品洗入500mL容量瓶中，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。 ②一面转动一面加入5毫升亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质， （3）过滤：加水定容，放置0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，上层脂肪用滴管吸弃去初滤液30mL，滤液备用。 2 标准曲线的绘制 精密吸取0.00, 0.20, 0.40, 0.60, 0.80, 1.00, 1.50, 2.00, 2.50mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1、2、3、5、7、10、12.5µg亚硝酸钠)，分别置于除。 50mL比色管中.各加2mL对氨基苯磺酸溶液(4g/L)，混匀，静置3-5min后各 加入1mL 0.2％盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min， 以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度A，绘制标准曲线。 3 试样的侧定 精密吸取按40.0mL样液于50mL比色管中。以下按标准曲线测定方法依次加入其它试剂。加水稀释至刻度，混匀，静置15min，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度A。 同时做试剂空白。 六、数据记录 管号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 样液 结果保留小数点后2位有效数字。 A538 七、数据处理 按下式计算： A X = ——————— × 1000 v1 m × —— × 1000 V2 式 中 : X — 试样中亚硝酸盐的含量， mg/kg； V1— 测定时所取溶液体积，mL； V2 — 试样处理液总体积，mL； m — 试样质量，g； A—试样测定液中亚硝酸盐的质量，µg； 部分食品中亚硝酸盐的限量标准（以NaNO2计） 品 名 限量标准 mg/kg 食盐（精盐）、牛乳粉 ≤2 香肠（腊肠）香肚、酱腌菜、广式腊 肉 ≤20 鲜肉类、鲜鱼类、粮食 ≤3 肉制品、火腿肠、灌肠类 ≤30 蔬菜 ≤4 其他肉类罐头、其他腌制罐头 ≤50 婴儿配方乳粉、鲜蛋类 ≤5 西式蒸煮、烟熏火腿及罐头、西式火腿罐头 ≤70