龙香膏制备工艺的优化

李怀国;刘东文;潘见欢;郑芳昊;陈淑映;蓝义琨

【摘 要】目的:优化龙香膏的制备工艺.方法:以药物投料质量、基质质量和促渗剂质量为考察因素,以24 h内西贝母碱的体外累积渗透量为指标,采用正交试验设计法优化龙香膏的制备工艺.结果:促渗剂质量对西贝母碱体外累积渗透量有显著影响,各因素影响程度为促渗剂质量>药物投料质量>基质质量.龙香膏的最佳制备工艺为药物投料质量35 g、基质质量65 g、促渗剂质量1.5 g.结论:本研究优化的龙香膏制备工艺增强了西贝母碱的体外累积渗透量,有利于其渗透入皮肤进而到达患处.%OBJECTIVE:To optimize the preparation process of

Longxianggao .METHODS: To set the drug inventory , foundation quality and permeability dose of promotion as investigation factors and

cumulative osmotic quantity in vitro of sipeimine within 24 h as indicators, preparation process were optimized by orthogonal experimental . RESULTS: The permeability dose of promotion had significant effects on cumulative osmotic quantity in vitro of sipeimine , the effective factors were

permeability dose of promotion >drug inventory >foundation quality .The best preparation technology of Longxianggao was quality of drug release 35 g, foundation quality 65 g, the quality of permeability dose 1.5 g.CONCLUSIONS:The optimized preparation process of Longxianggao enhance the cumulative osmotic quantity in vitro of sipeimine , which helps to penetrate into the skin tissue . 【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》

【年(卷),期】2017(017)003 【总页数】4页(P318-320,323) 【关键词】龙香膏;西贝母碱;制剂工艺

【作 者】李怀国;刘东文;潘见欢;郑芳昊;陈淑映;蓝义琨

【作者单位】佛山市中医院制剂中心,广东佛山 528000;佛山市中医院制剂中心,广东佛山 528000;佛山市中医院制剂中心,广东佛山 528000;佛山市中医院制剂中心,广东佛山 528000;佛山市中医院制剂中心,广东佛山 528000;佛山市中医院制剂中心,广东佛山 528000 【正文语种】中 文 【中图分类】R943

龙香膏是佛山市中医院研制的医院制剂，具有收湿敛疮、散结消肿、解毒生肌的功效，临床主要用于治疗湿热肿毒、疮疡不敛等[1]。龙香膏由炉甘石、川贝母、龙脑等8味药材组成。其中，炉甘石收湿敛疮、解毒生肌，为君药；川贝母散结消肿，为臣药，均是本方的重要组成药味[2-3]。龙脑具有清热解毒、生肌的功效，在方中既是具有一定治疗作用的组成药味，也是软膏剂的促渗剂，可帮助方中有效成分渗透进入皮肤[4-7]。龙香膏作为外用软膏剂，其组方具有内外兼顾的特点：一方面，炉甘石等矿物药在皮肤表面收湿敛疮，减小疮疡面；另一方面，川贝母等药味的有效成分透过皮肤作用于患处，起到散结消肿的功效。通常矿物药作用于皮肤表面，其量效关系较明确。而需要透皮吸收药物的量效关系相对复杂，与药物本身性质、基质质量和促渗剂的使用密切相关。龙香膏的原配方投料、基质、促渗剂(龙脑)质量比为30 ∶70 ∶1，而临床观察到其透皮吸收效果不够理想，散结消肿

作用相对缓和，无法及时减轻患者的病痛。因此，本研究在前期工作基础上，以川贝母的有效成分西贝母碱为指标，考察了药物投料质量、基质质量和促渗剂质量对龙香膏体外累积渗透量的影响。 1.1 仪器

Angilent 7530G型紫外-可见分光光度计(美国安捷伦科技有限公司)。 1.2 药品与试剂

西贝母碱对照品(批号：1213511-2012521，购自中国药品生物制品检定所)；龙香膏(佛山市中医院，批号：1521232)；浓氨试液(北京华科盛精细化工产品贸易有限公司)、三氯甲烷(东营市硕驰化工有限公司)、溴甲酚绿(沈阳先创化工有限公司)、磷酸二氢钾(廊坊鹏彩精细化工有限公司)、甲醇(无锡市展望化工有限公司)、氢氧化钠(天津市凯通化学试剂有限公司)等试剂均为分析纯。 1.3 动物

SD雄性大鼠(SPF级)20只，平均体质量(200±20) g，由广州中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(粤)2008-0021。 2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液：取西贝母碱对照品适量，精密称定，加入三氯甲烷制成每1 ml含西贝母碱0.2 mg的溶液，即得。

2.1.2 缓冲溶液：取溴甲酚绿0.05 g，加入0.2 mol/L氢氧化钠溶液6 ml进行溶解，加磷酸二氢钾1 g，加水使溶解并稀释至100 ml，即得0.05%溴甲酚绿缓冲溶液。

2.1.3 供试品溶液：取样品约2.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入浓氨试液3 ml及三氯甲烷-甲醇(V ∶V=4 ∶1)混合溶液40 ml，于80 ℃水浴加热回流2 h，放冷，滤过。滤液置于50 ml容量瓶中，取适量三氯甲烷-甲醇(V ∶V=4 ∶1)混合溶液清洗药渣2～3次，并稀释至刻度。精密量取上述溶液5 ml，置于25 ml

具塞试管中，水浴蒸干，精密加入三氯甲烷10 ml溶解，即得。 2.2 紫外-可见分光光度法测定西贝母碱的含量

2.2.1 波长的选择：根据仪器软件设置相应的参数，取“2.1.1”项下对照品溶液进行全波长扫描，根据扫描结果选择最大吸收波长。结果表明，西贝母碱的最大吸收波长为417 nm，见图1。

2.2.2 线性关系考察：分别精密量取“2.1.1”项下对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、1.0 ml，置于25 ml具塞试管中，分别加入三氯甲烷至10 ml，并加入精密量取的水5 ml及“2.1.2”项下缓冲溶液2 m1，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30 min。取三氯甲烷溶液，用干燥滤纸滤过，以续滤液为空白，采用紫外-可见分光光度法，在417 nm的波长下测定吸光度。以吸光度为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)进行线性回归，得西贝母碱的回归方程为Y=0.235 6 X+0.002 1，r=0.999 8。结果表明，西贝母碱质量浓度在2.0～20.0 μg/ml范围内线性关系良好，见图2。

2.2.3 精密度试验：量取“2.1.1”项下对照品溶液适量，取三氯甲烷溶液，用干燥滤纸滤过，以续滤液为空白，采用紫外-可见分光光度法，在417 nm的波长下连续测定6次吸光度。结果表明，RSD=1.21%(n=6)，表明仪器精密度良好。 2.2.4 稳定性试验：取“2.1.3”项下供试品溶液适量，分别于放置0、2、4、8、12、24 h时测定西贝母碱含量。结果表明，RSD=1.34%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好，可以用于样品的含量测定。

2.2.5 加样回收率试验：取已知含量的样品适量，共6份，分别加入一定量的西贝母碱对照品，按照“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，加入精密量取的水5 ml及“2.1.2”项下缓冲溶液2 m1，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30 min。取三氯甲烷溶液，用干燥滤纸滤过，以续滤液为空白，在417 nm的波长下测定吸光度。结果表明，平均加样回收率为97.75%，RSD=0.32%，说明西贝母

碱在样品处理过程中损失较少，方法可靠。 2.3 体外透皮试验

2.3.1 离体皮肤的制备：选取腹部皮肤无明显异变的成年健康SD大鼠，均匀涂抹脱毛膏脱毛，开始前断头处死，小心剪下腹部皮肤，剔除皮下组织和脂肪等皮肤黏连物，采用0.9%氯化钠溶液洗净，备用。

2.3.2 累积渗透量的计算：将皮肤固定于扩散池接口，角质层面向供给室，真皮层面向接收室。打开恒温水浴循环[(37±1) ℃]和磁力加热搅拌器(300 r/min)适应1 h。待系统稳定后，在皮肤表面均匀涂抹软膏剂，以0.9%氯化钠溶液为接收液在设定时间点0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、24.0 h分别从接收室内取样1 ml，并及时补充接收液。样品经0.45 μm微孔滤膜过滤后，采用紫外-可见分光光度法测量西贝母碱的含量，按以下公式计算累积渗透量(Qt)，

Qt=(Cn×V+∑Ci×Vi)/A(Cn为不同取样点时接收液的浓度，Ci为各取样点时取样液的浓度；V和Vi分别为接收室体积和取样体积；A为透皮扩散面积)[8]。 2.3.3 回收率测定：精密量取皮肤接收液样品适量，共6份，分别加入一定量的西贝母碱对照品，用适量三氯甲烷溶解，参照“2.2”项下紫外-可见分光光度法进行测定。结果表明，平均回收率为101.13%，RSD=2.14%，说明操作过程中西贝母碱损失较少，不影响测定结果。 2.4 正交试验设计法优化工艺

以药物投料质量(A)、基质质量(B)和促渗剂(龙脑)质量(C)3个因素为考察指标，每个因素设置3个水平(见表1)，按照L9(34)正交试验表设计试验，分别制备龙香膏样品。参照“2.3”项下方法进行体外透皮试验，以24 h内西贝母碱的体外累积渗透量为指标，考察不同因素对渗透作用的影响。采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。结果表明，影响西贝母碱累计渗透量的因素C>A>B，即促渗剂质量是主要影响因子，药物投料质量次之，基质质

量影响相对较小，见表2。极差分析结果表明，龙香膏处方的最优配比为A2B2C3，即药物投料质量为35 g、基质质量为65 g、促渗剂质量为1.5 g，见表3。 2.5 处方验证性试验

根据“2.4”项下优化的处方(A2B2C3)制备龙香膏样品6批。参照“2.3”项下体外透皮试验的方法，与优化前的6批样品进行对比研究。采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果表明，处方优化前龙香膏中西贝母碱的体外渗透累积量为(288.51±34.26) μg/cm2，优化后为(395.26±28.16) μg/cm2，为优化前的1.37倍，见图3。经t检验，组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，说明该处方的渗透作用有所增加。

川贝母在我国使用历史悠久，具有清热润肺、化痰止咳、散结消痈的功效，可用于治疗肺热燥咳、干咳少痰、阴虚劳嗽、痰中带血、瘰疬、乳痈、肺痈等。川贝母外用具有散结消肿的作用，在龙香膏中处于臣药的重要位置。川贝母的来源较多，化学成分也比较复杂，通常认为其有效成分为生物碱类化合物。历年的《中华人民共和国药典》均将西贝母碱含量作为川贝母质量控制的指标。由于西贝母碱属于甾体类生物碱，自身缺少光化学的特征，常用的光学检测器并不能对其进行很好的检测。目前，许多相关研究均采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)测定西贝母碱的含量，并使用蒸发光散射检测器(evaporative light-scattering detector，ELSD)。如许红莉等[9]采用HPLC法测定了半贝丸中腺苷、鸟苷、西贝母碱和西贝母碱苷的含量；高森等[10]采用HPLC-ELSD测定了猴枣牛黄散中乔松素、小豆寇明、西贝母碱和西贝母碱苷的含量；霍务贞等[11]采用HPLC-ELSD测定了蛇胆川贝散生产过程西贝母碱的含量变化；蔡晓翠等[12]采用HPLC-ELSD测定了新疆道地药材伊贝母的西贝母碱含量；段宝忠等[13]采用UPLC-ELSD法同时测定了伊贝母中贝母辛和西贝母碱的含量。而《中华人民共和国药典》(2015年版)“川贝母”项下收录的西贝母碱含量测定

方法为紫外-可见分光光度法[14]，相比HPLC技术，该方法精密度和准确度略低，但是操作简便，即使在实验条件稍差的单位也可实现。本研究结果表明，紫外-可见分光光度法可用于龙香膏中西贝母碱的含量测定。

累积渗透量是评价完整皮肤外用制剂质量的重要指标，测定方法包括在体和离体2种方式。通过体外透皮试验，可以初步了解软膏剂的渗透性能，为处方筛选提供参考依据。透皮过程除与皮肤自身情况有关外，还主要与药物性质、基质组成和促渗剂的使用等有关。常用的促渗剂有氮酮、油酸、乙醇、丙二醇及萜烯类等。龙脑是龙香膏的重要组成药味，具有解毒生肌的功效。同时，龙脑也属于萜烯类促渗剂，其作用与氮酮类似，主要作用于表皮的角质层，通过破坏角化细胞间质，造成角质层裂解剥脱，促使表皮细胞间裂隙增大，最终减轻皮肤对药物的阻滞作用[15]。本研究以西贝母碱累积渗透量为指标考察龙香膏的渗透作用，而促渗剂(龙脑)质量是其关键影响因素。在一定范围内，增加处方中龙脑的比例，有助于有效成分渗透进入皮肤到达患处。

但值得注意的是，药物透皮吸收过程受多种因素的影响。体外透皮试验模型虽然尽力考虑了透皮吸收的影响因素，并在温度控制、进样孔封闭与否、pH、搅拌方式、驱动方式及连续自动测定等方面进行了多次改进[16-18]，但目前尚无法完全替代体内透皮吸收的情况。因此，本研究的相关结果尚需在活体动物模型上进一步验证。 综上所述，紫外-可见分光光度法可用于测定龙香膏中西贝母碱的含量。本研究通过体外透皮试验优化了龙香膏的制备工艺，为制剂工艺的提高奠定了基础。

【相关文献】

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