甜菊糖苷提取新方法

第３６卷第１期　南昌大学学报（理科版）　Ｖｏ１．３６　Ｎｏ．１　２０１２年２月　Ｊｏｕｒｎａ１　ｏｆ　Ｎａｎｃｈａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａ１　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　Ｆｅｂ．２Ｏ１２　文章编号：１００６—０４６４（２０１２）０１—００６９—０４　甜菊糖苷提取新方法　丰　雪，付娟娟，温辉梁　（南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌　３３００４７）　摘要：以甜叶菊为基本原料，对甜叶菊中的甜菊糖苷的提取工艺条件进行优化，以提高甜菊糖苷的提取率，同时　确定纤维素酶对甜菊糖苷提取率的影响。依据单因素和正交试验得出了获得最高甜菊糖苷提取率的条件是：料液　比１：１０，纤维素酶质量浓度０．２　，提取温度５０℃，提取时间９０　ｍｉｎ，溶液ｐＨ为５，该条件下的提取率为１３．９８　，　比优化前高出了１．９４　。　关键词：甜菊糖苷；纤维素酶；提取；工艺；正交试验　中图分类号：ＴＳ２４５．９　文献标志码：Ａ　Ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ＦＥＮＧ　Ｘｕｅ，ＦＵ　Ｊｕａｎ—ｊｕａｎ，ＷＥＮ　Ｈｕｉ—ｌｉａｎｇ　（Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ　３３００４７，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｉｔｈ　Ｓｔｅｖｉａ　ａｓ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｃ　ｒａｗ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｗｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｔｈｅ　ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｕｒｐｏｓｅ　ｏｆ　ｅｎｈａｎｃｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ，ａｎｄ　ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｔｉｍｅ，ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｅｌ—　ｌｕｌａｓｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ．Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ。ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａ—　ｂｏｕｔ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｓｔｅｖｉａ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ，ｗｈｅｒｅ　ｔｈｅ　ｓｏｌｉｄ—ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　１：１０　ａｎｄ　０．２　９／６　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｔ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　５０。Ｃ　ａｎｄ　ｕｎｄｅｒ　ｐＨ＝５　ｆｏｒ　９０　ｍｉｎｓ．　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗａｓ　１３．９８　９／６，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　１．９４　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｂｅｆｏｒｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ；ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　甜菊糖苷是从菊科草本植物甜叶菊中精提的新　素酶对甜菊糖苷提取率的影响。　型甜味剂。它是一种无热量的食品甜味剂［１－３３，兼　１　实验部分　有降低血压、促进代谢、治疗胃酸过多等作用［４－７３。　１．１仪器与试剂　纤维素酶具有极高的活性和高度专一性，可在　ＴＵ～１９００紫外可见分光光度计（上海精密科学　常温、常压和温和的酸碱条件下，高效地进行催化反　仪器有限公司）；ＳＨＺ～ＩＩＩ型循环水真空泵（郑州杜甫　应【８　。。。目前，提取甜菊糖苷的主要方法有热水浸　仪器厂）；ＤＨＧ－９１４０型电热恒温鼓风干燥箱（上海　提法＿１　，超声提取法口　，超临界萃取法＿１。　等。甜菊　一恒科技有限公司）。　叶在高温蒸煮过程和超声中会产生多种类型的杂　甜叶菊（江西赣县的甜叶菊干叶）；甜菊糖苷纯　质，如蛋白质、果胶、鞣质等，会影响甜菊糖苷的析　品（江西赣州菊隆高科技实业有限公司，纯度　出，并给分离带来困难；超临界萃取可以得到纯度较　９７　）；纤维素酶（酶活力ｕ／ｇ￣＞１５　０００．０），氧化钙，　高的甜菊糖苷，但要求实验条件较高且产率较低。　硫酸铝钾，浓硫酸，乙酸，蒽酮等（上海国药集团）试　纤维素酶可以破坏细胞壁结构，从而可以使叶片中　验中所用试剂均为分析纯。　的甜菊糖苷在较低的温度下溶于溶剂中口　。本　１．２实验方法　工作拟采用单因素和正交２种试验方法来研究纤维　１．２．１　甜菊叶的预处理　将甜菊叶粉碎过８０目　收稿日期：２０１１一Ｏ７—２Ｏ。　作者简介：丰雪（１９８７一），女，硕士生。＊通信作者：温辉梁（１９６３一），男，教授。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｌｗｅｎ＠ｓｏｈｕ．ｔｏｍ。　南昌大学学报（理科版）　筛，取３０　ｇ干燥至恒重的粉末于烧杯中，加入一定　量水、适量纤维素酶，置于一定温度的水浴锅中水浴　加热一定时间，过滤，残渣加水和纤维素酶再提取１　次，合并滤液。滤液加入一定量的氧化钙和硫酸铝　钾除杂，得粗提液。　１．２．２　甜菊糖苷提取的工艺优化　选取料液比、纤　维素酶添加量、提取时间、提取温度、提取液ｐＨ值　５个因素，在单因素实验基础上，采用Ｌ。（４。）正交实　验［１　优化甜菊糖苷的提取工艺。　１．２．３标准曲线的制作准确称取５Ｏ℃真空干燥　至恒重的甜菊糖苷纯品０．１　ｇ于平底烧瓶中，加入　３０　ｍＩ　水溶解，加入质量浓度１０　的硫酸２０　ｍＩ　，　混匀，１００℃水浴１．５　ｈ，冷却后过滤于１００　ｍＬ的容　量瓶中，将平底烧瓶和滤纸洗３～４次，定容摇匀倒　入小烧杯中。从里面取ｌ，２，３，４，５，６　ｍＬ溶液于　１００　ｍＬ容量瓶中定容。利用蒽酮一硫酸比色法ｌ＿１　在６０６　ｒｌｌＴｌ处测定吸收波长，以吸光值和溶液浓度　分别为纵坐标和横坐标绘制标准曲线，得回归方程。　２结果与讨论　２．１甜菊糖苷标准曲线及其回归方程　按照线性关系考察方法操作１次，得到甜菊糖　苷标准曲线图１，以吸光度值Ｘ对甜菊糖苷浓度Ｙ　做回归计算，回归方程如下：　Ｙ一０．００４　５Ｘ一０．０００　６　该方程线性关系良好（Ｒ。一０．９９９　５），表明甜菊　糖苷在１．０×１０　ｇ・ｍＩ　～６．０×１０　ｇ・ｍＬ　范围内与吸光度呈良好的线性关系，可应用此方程　计算待测溶液中甜菊糖苷的含量。　ｏ　ｏ　０　。　ｏ　０　｛ｐｐｍ　图ｌ甜菊糖苷标准曲线　２．２甜菊糖苷提取工艺单因素试验　２．２．１提取中料液比对甜菊糖苷提取工艺的影响　在提取过程中添加纤维素酶０．０６　ｇ，调节ｐＨ为　４．５，温度控制在４５℃，分别添加不同料液比的水提　取９０　ｍｉｎ，测得各条件下的提取率如图２：　婚　料液比　图２料液　对甜菊糖苷提取率的影响　从图２可以看出，提取过程中的料液比对甜菊　糖苷的提取率有较大影响。从作图的结果中可以发　现随着料液比的增加，提取率也增加。在料液比从　１：４到１：１０倍的过程中，提取率增长趋势明显，　但在料液比达到１：１Ｏ后，再增加料液比，甜菊糖苷　的提取率增长趋势明显下降。这是由于当料液比达　到１：１０后，甜菊糖苷基本全部浸出，再增加料液比　只会增加实验过程中的能耗，而不会大幅度的提高　甜菊糖苷的提取率。综合各种因素，在实验过程中　料液比在１：１Ｏ左右为最佳选择。　２．２．２提取温度对甜菊糖苷提取工艺的影响　在　提取过程中加３００　ｍＬ水，添加纤维素酶Ｏ．０６　ｇ，调　节ｐＨ为４．５，分别在不同的温度下提取９０　ｍｉｎ，最　后测各组甜菊糖的提取率，数据见图３：　』／　图３提取温度对甜菊糖苷提取率的影响　从图３可以看出，随着温度的升高，提取率也在　升高，但当温度超过５０℃时，提取率逐渐下降，这是　由纤维素酶的性质决定的。纤维素酶是一种蛋白　质，在５Ｏ℃以上时，随着温度的升高，蛋白质开始变　性，酶活随之下降，提取率降低，但在温度较低时，浸　出速度降低，降低了甜菊糖苷的提取率。因此，纤维　素酶提取甜菊糖苷的最佳温度为５０℃。　２．２．３纤维素酶用量对甜菊糖苷提取工艺的影响　在提取过程中，加３００　ｍＬ水，调节ｐＨ为４．５，温　度控制在４５℃，每次提取９０　ｒａｉｎ，考察添加不同量　的纤维素酶对提取率的影响，结果见图４：　从图４可以看出，随着酶用量的增加，提取率的　也随之上升，但当酶用量达到０．２　时，提取率没有　第１期　丰雪等：甜菊糖苷提取新方法　斛　磷　酶的质量浓度／　图４　纤维素酶用量对甜菊糖苷提取率的影响　很大程度的上升，说明当酶用量达到０．２　时，甜叶　菊中的纤维素已接近完全分解，酶用量的增加对甜　菊糖苷的提取率影响不明显，可以确定纤维素酶的　用量控制在０．２　附近最佳。　２．２．４　提取液ｐＨ对甜菊糖苷提取工艺的影响　在提取过程中加３００　ｍＬ水，添加纤维素酶０．０６　ｇ，　温度控制在４５℃，每次提取９０　ｍｉｎ，添加不同量的　稀盐酸和碳酸氢钠调节溶液的ｐＨ，考察不同ｐＨ对　甜菊糖苷提取率的影响，结果见图５：　１ｊ｝Ｌ　盛　ｐＨ值　图５提取液ｐＨ对甜菊糖苷提取率的影响　从图５可以看出，提取液ｐＨ对甜菊糖苷的提　取率影响较大，ｐＨ从３到５的过程中，提取率不断　增加，ｐＨ大于５时，提取率又逐渐降低，这是因为　每种酶都有它的最适ｐＨ值，在最适ｐＨ值下纤维　素酶可以发挥出它的最大活力，最大限度的作用于　甜菊叶细胞壁中的纤维素，破坏细胞壁，使甜菊糖苷　更容易进入到提取液中。故，在提取过程中的最佳　ｐＨ在５左右。　２．２．５提取时间对甜菊糖苷提取工艺的影响　在　提取过程中加３００　ｍＬ水，添加纤维素酶０．０６　ｇ，调　节ｐＨ为４．５，温度控制在４５℃，考察不同提取时间　对提取率的影响，结果见图６：　从图６可以看出，随着提取时问的增加提取率　逐渐增加，到９０　ｍｉｎ时，提取率增长趋势降低。这　是因为随着提取时间的增加，纤维素酶的作用时间　越长，对甜菊叶中的纤维素水解的越完全，当提取时　间到达９０　ｍｉｎ时，甜菊糖苷已基本溶出，继续增加　提取时间，提取率增长变缓，还会增加能耗。综合各　种因素，提取时问在９０　ｍｉｎ左右为最佳。　１４．５　１４．Ｏ　篓ｌ３．５　１３．Ｏ　１２．５　５Ｏ　８０　ｌ１０　ｔ｜ｈ　图６提取时间对甜菊糖苷提取率的影响　２．３正交试验　从单因素试验结果中进行比对，可以发现料液　比对其它各因素影响结果较小，因此我们确定在提　取过程中添加１Ｏ倍于甜菊叶质量的水。利用剩下　的酶的用量、时间、温度、ｐＨ　４个因素作四因素三水　平的正交试验，各因素水平见表１，正交试验结果见　表２。　表１　正交试验因素水平表　水平　丽　－　１　ｏ．１５　７０　４０　４．５　２　ｏ．２０　９０　４５　５．ｏ　３　ｏ．２５　１１ｏ　５０　５．５　从表２中可以看出，各因素对甜菊糖苷提取率　的影响次序为酶的质量浓度＞提取温度＞提取时间　＞ｐＨ。最优方案为Ａ。Ｂ　Ｃ。Ｄ　，酶的质量浓度为　０．２　，提取时间９０　ｍｉｎ，提取温度５０℃，溶液ｐＨ　为５，料液比为１：１０，提取率为１３．９８　。　表２正交试验结果与分析　试验号　因素　提取率／　Ａ　Ｂ　Ｃ　Ｄ　１　Ｉ　１　１２．８７７　ｌ３．１２０　ｌ３．１２Ｏ　１３．２９３　ｌ３．７１３　１３．５７０　１３．５４７　１３．５７７　１３．６５ｏ　１３．５５０　１３．５７３　１３．３７ｏ　ｏ．８３６　ｏ．４５０　Ｏ．４５３　ｏ．２８４　２．４验证试验　用上述最佳条件重复试验３次，３次得甜菊糖　苷的提取率分别为１３．９６　，１３．９７　，１３．９９　，由　此数据可知优化后的条件，提取率较高，重复性较　１　２・　７２　・　南昌大学学报（理科版）　２０１２年　好。　［５］　于喜水，孙玉华．甜菊苷类的研究与开发［Ｊ］．黑龙江医　药，２００３，１６（１）：４１—４２．　３　结论　通过单因素试验与正交试验，我们得出了甜菊　［６］赵瑜藏，张运申．甜菊的化学成分及开发利用研究［Ｊ］，　安阳师范学院学报，２０００，２４（２）：４０—４２．　［７］ＧＥＵＮＳ　Ｊ　Ｍ　Ｃ．Ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，　６４：９１３—９２１．　糖苷提取的最佳工艺条件为纤维素酶的质量浓度为　０．２　，提取时间９０　ｒａｉｎ，提取温度５Ｏ℃，溶液ｐＨ　为５，料液比１：１０，该条件下的提取率为１３．９８　。　［８］　宋京城，蔡建．纤维素酶在食品工业中的应用［Ｊ］．农产　品加工，２０１０，６９（３）：６９—７１．　通过此试验，我们还可以看出，在提取过程中添　加纤维素酶之后，提取率比不加纤维素酶的高出了　１．９４　。添加纤维素酶后，在缩短提取时间，降低提　取温度的同时提高了甜菊糖苷的提取率。　［９１王璋．食品酶学［Ｍ］．北京：中国轻工业出版社，２００２：　１６Ｏ一１６４．　［１Ｏ］王在贵，张莉，张宏福，等．纤维素酶的酶学性质研究　［Ｊ］．中国饲料，２００６（１）：１２—１４．　［１１１　ＩＡＵ　Ｊｉｅ，ＬＩ　Ｊｉｎｗｅｉ，ＴＡＮＧ　Ｊｉａｎ．Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｌｌｙ　Ａｓｓｉｓｔｅｄ　参考文献：　［１］ＧＥＵＮＳ　Ｊ　Ｍ　Ｃ，ＡＵＧＵＳＴＩＪＩＮＳ　Ｐ，ＭＯＬＳ　Ｒ．Ｍｅｔａｂｏ一　ｌｉｓｍ　ｏｆ　Ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ　ｉｎ　Ｐｉｇｓ　ａｎｄ　Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ，Ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅ　Ａ　ａｎｄ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ　Ｆｒｏｍ　Ｓｔｅｖｉａ　Ｒｅｂａｕ—　ｄｉａｎａ　Ｂｅｒｔｏｎｉ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，２０１０，８８：２１５－２２１．　［１２３滕祥金．甜叶菊糖苷的提取纯化及分析检测方法的研　Ｓｔｅｖｉｏｌ［Ｊ　１．Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００３，４１　ｌ　１５９９—１６Ｏ７．　究［Ｄ］．哈尔滨：东北农业大学，２００７．　［１３］刘石林，向建南，吕守本．从甜菊叶中提取和精制甜菊　昔的方法［Ｊ］．蚌埠医学院学报，１９９５，２０（６）：４２５—４２７．　　ａ１．　［２］　ＷＨＥＥＬＥＲ　Ａ，Ｂ０ＩＩ　ＥＡＵ　Ｃ，ＷＩＮＫＬＥＲ　ＰＣ，ｅｔＰｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅ　Ａ　ａｎｄ　Ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ　Ａｆ—　［１４］刘晓晶，李田，翟增强．纤维素酶的研究现状及应用前　景［Ｊ］．安徽农业科学，２０１１，３９（４）：１９２０—１９２１．　［１５］王登良，严玉琴，王盈峰，等．酶法浸提枸杞的研究［Ｊ］．　食品与生物技术学报，２００６，２５（１）：７９—８８．　［１６］张雪颖，徐仲伟，战宇，等．酶法浸提甜菊糖甙的研究　［Ｊ］．食品工业科技，２００７，２８（５）：１９０—１９２．　［１７］侯宗福，张彬，周武，等．北沙参水溶性多糖提取工艺　［Ｊ］．南昌大学学报：理科版，２００７，３１（１）：７９—８１．　ｔｅｒ　Ｓｉｎｇｌｅ　Ｏｒａｌ　Ｄｏｓｅｓ　ｉｎ　Ｈｅａｌｔｈｙ　Ｍｅｎ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａ１　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００８，４６：５４—６０．　［３］　ＣＡＴＨＡＲＩＮ０　Ｒ　Ｒ，ＳＡＮＴ０Ｓ　Ｌ　Ｓ．０ｎ－Ｌｉｎｅ　Ｍｏｎｉｔｏ—　ｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ　Ｓｗｅｅｔｅｎｅｒ　Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｔＯ　Ｓｔｅｖｉｏｌ　ｉｎ　Ａｃｉｄｉｃ　Ａｑｕｅｏｕｓ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２０　１　１，３：　１—４．　［４１　ＭＵＡＮＤＡ　Ｆ　Ｎ，ＳＯＵＩ　ＩＭＡＮＩ　Ｒ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｃｈｅｍｉｃａ１　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ　ａｎｄ　［１８］付志红，谢明勇，聂少平，等．车前子中多糖含量的测定　［Ｊ］．南昌大学学报：理科版，２００３，２７（４）：３４９—３５２．　［１９］项秀珠，郭秀珠，黄品湖．甜菊贰含量的测定方法研究　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｓｔｅｖｉａ　ｒｅｂａｕｄｉａｎａ　Ｂｅｒｔｏｎｉ　ｌｅａｖｅｓ［Ｊ］．　ＬＷＴ—Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，４４：１８６５—　１８７２．　［Ｊ］．浙江农业科学，１９９６（２）：９７～９９．　（上接第６４页）　［１３］邱瑾，邵爽，游金宗．荧光法研究奥沙利铂与牛血清白　蛋白结合作用的研究［Ｊ］．化学学报，２０００，５８（１２）：　１６４９—１６５３．　蛋白的相互作用［Ｊ］．分析测试学报，２００７，２６（１）：５１—　５４．　［１７］张国文，汪佳蓉，杨佳，等．荧光光谱法研究三唑磷对　ＤＮＡ的损伤作用［Ｊ］．南昌大学学报：理科版．２００９，　３３（５）：４５２—４５５．　［１４］何文英，陈光英，杜娟，等．光谱法与分子模拟研究胡　椒碱对牛血清白蛋白的键合作用［Ｊ］．化学学报，　２００８，６６（２１）：２３６５—２３７０．　［１８］马春琪，李克安．牛血清白蛋白与铬天青ｓ作用机理　ｒ　１　５］　ＲＯＳＳ　Ｐ　Ｄ，ＳＵＢＲＡＭＡＮＩＡＮ　Ｓ．Ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ：Ｆｏｒｃｅｓ　Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｎｇ　ｔＯ　的研究Ｉ－Ｊ］．化学学报，１９９９，５７（４）：３８９—３９５．　［１９］颜承农，李杨，关中杰，等．荧光光谱法研究丙酮与牛　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８１，２０：３０９６—３１０２．　［１６］易平贵，商志才，俞庆森，等．丝裂霉素Ｃ与牛血清白　血清白蛋白的相互作用［Ｊ］．环境科学学报，２００６，２６　（１１）：１８８１—１８８５．