饲料公司饲料中粗蛋白的测定

1 适用范围

本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料中粗蛋白含量的测定。 2 原理

各种饲料的有机物质在还原性催化剂(如CuSO4，K2SO4或Na2SO4或Se粉)的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮（在一定处理下也包括硝酸态氨）都转变成NH4+并与H2SO4化合成（NH4）2SO4，而非含氮物质，则以CO 2 ↑，H2O↑，SO 2↑状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的铵态氮，用硼酸溶液吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿作指示剂，用HCl标准溶液（ 0.1mol/L）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25系数计算），即为粗蛋白质的含量。

其主要化学反应如下：

1、2NH4（CH2）2COOH+13H2SO4→（NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2（丙氨酸）

2、（NH4）2SO4 +2NaOH→2NH 3+3H2O+2Na2SO4 3、4H3BO3+ NH 3→NH4HB4O7+5H2O 4、NH4HB4O7+HCl+5H2O→NH4C1+4H3BO3

本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺、铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白质表示之。 3 试剂

3.1 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮；

3.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水，6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀；

3.3 氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）； 3.4 硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）；

3.5 混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月；

3.6. 盐酸标准溶液：0.1mol/L； 3.7 蔗糖：分析纯；

3.8 硫酸铵：分析纯，干燥；

3.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。 4 仪器设备

4.1 实验室用样品粉碎机或研钵； 4.2 分样筛：孔径0.45 mm(40目)； 4.3 分析天平：感量0.0001 g； 4.4 消煮炉；

4.5 滴定管：酸式，10、25 mL；

4.6 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式； 4.7 锥形瓶：150、250 mL； 4.8 消煮管：250 mL；

4.9 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白

质测定仪。 5 分析步骤 5.1 全量法 5.1.1试样的消煮

称取试样0.2～0.5g（玉米、小麦称0.7～1.0g；豆粕称0.4g；鱼粉、羽毛粉称0.3g），精确至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（硒粉和硫酸钾混合物，市场上有成品）或6.4g混合催化剂，13 ml浓硫酸，于420℃下在消化炉上消化至消化管内呈现蓝色时继续消化40min。取出冷却后加入30 ml蒸馏水。 5.1.2 氨的蒸馏

采用全自动定氮仪时，按仪器本身常量程序进行测定。 采用半自动定氮仪时，将带消化液的消化管插在蒸馏装置上，以30 mL硼酸为吸收液，加入2滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入约50 mL氢氧化钠溶液至消化管内液体呈黑色，进行蒸馏。吸收液体积达到150 mL时，停止蒸馏，用蒸馏

水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。 5.1.3 滴定

用0.1 mol/L的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

V2V1c0.01406.251006 空白测定

m称取蔗糖0.5g，代替试样，进行空白测定，消耗0.1 mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2 mL。 7 分析结果的计算和表述 计算见下式： 蛋白质（%）=

式中：V2──滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；

V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； c──盐酸标准溶液浓度，mol/L； m──试样质量，g

0.0140──与1.00 mL盐酸标准液[c(HCl)=1.000 mol/L]相当的、以克表示的氮的质量。

6.25──氮换算成蛋白质的平均系数。

8 重复性

当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为1%。 当粗蛋白质含量在10%～25%之间时，允许相对偏差为2%。

当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。 9 注意事项

9..1消化要在通风橱中进行。 9..2定氮仪不能漏气。 10 结果准确度的保证和评价 10.1 结果准确度的保证

10.1.1如果是新的可调节电炉可适当调节其温度，消化时间据实际情况而定。

10.1.2每次做空白试验较正装置。 10.1.3定期做测定回收率实验

具体方法：精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，用全量法“氨的蒸馏”中的步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

10.1.4蒸馏后的液体不能放置太长时间，要及时滴定。 10.1.5消化温度应控制在400℃～420℃内。消化器控温器应良好，电阻丝应使用专用配套电阻丝，拉伸应均匀，使炉内温度均匀。

10.1.6蒸馏完毕应先取下接受瓶，然后在关闭电源，以免酸液倒流。

10.2 准确度的评价 10.2.1测定回收率

10.2.1.1加硫酸铵检测回收率，如果合格，说明蒸馏装置不漏气和盐酸标准溶液溶液标定正确。具体方法见10.1.3定期测回收率实验。

10.2.1.2用已知含氮量的样品标准物（如含氮量在1.30%～1.40%之间的玉米粉）用半微量法或推荐法测定其含氮量，和标准物质含氮量进行比对，要求测定结果在要求范围之内。此方法可以评价整个过程的准确度。 10.2.2实验室比对

和国家认证的实验进行同样品实验数据比对。此方法可以评

价整个过程的准确度。分公司对饲料中粗蛋白数据可疑样品应送集团质检中心复测。