1、简述
显微鉴别法系志用显微镜对药材或饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。此法适用于:
(1)药材或饮片形状鉴别特征不明显或外形相似而组织机构不同; (2)药材或饮片呈粉末状或已破碎,不易辨认或区分; (3)凡含饮片粉末的制剂;
(4)用显微化学方法确定药材或饮片中有效成分在组织中的分布状况及其特征。
在进行显微鉴别时,首先要将样品制成适于镜检的标本。对于完整的药材或饮片可制成各种切面的切片,对于粉末药材或饮片(包括丸、散等成方制剂)可直接装片或作适当处理后制片。
药材或饮片切片标本的制作方法较多,在药材或饮片鉴定的研究工作中往往将其制成石蜡切片(永久切片),因制成的石蜡切片外形较完整,厚薄均匀,且可制得连续切片,即便于观察,又能长期保存。但由于制片技术较复杂,费时太多,不适用于日常检验,所以在中药鉴定工作中通常采用徒手切片或滑走切片法制片;为观察叶类、花类及全草类药材或饮片的叶片、花冠、萼片、苞片等的表皮组织及其附属物的特征,还需要将其制成表面装片;为去年清楚地观察比较坚硬的细胞组织,如导管、纤维、石细胞等的形态,往往还要进行“组织解离”后装片。观察花粉粒、孢子等的形态特征或构造,需用花粉粒与孢子制片法制片,观察矿物药或坚硬的动物类药材或饮片如珍珠,石决明及动物骨骼,可采用磨片法制片。这些镜检标本片一般都是在观察前临时制备,故统称为“临时制片技术”。
本规程以《中国药典》2010版和局颁、部颁标准收载品种的显微鉴别项目要求为主,故主要介绍与临时制片技术有关的仪器、用具、试液和操作方法等。 2、仪器与用具
2.1、仪器 生物光学显微镜(应配有目镜测微尺和载物台测微尺,最好具2.5×或4×物镜头和偏光装置)、显微摄影装置或显微描绘器、电脑联机装置及其图像处理软件、滑走切片机、小型粉碎机、台式离心机、医用超声仪等。 2.2、用具
2.2.1、 放大镜、刀片、解剖刀、镊子(包括粗镊及眼科弯镊与直镊)、剪(眼科剪与手术剪)、解剖针等。 2.2.2、载玻片、盖玻片。
2.2.3、吸湿器(即玻璃干燥改装成底部放入蒸馏水并加微量苯酚防霉,上部瓷板放置药材样品,利用潮气润湿样品)、培养皿或小烧杯(放切片用、切片后的处理均可在其中进行)、酒精灯、铁三脚架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒(粗与细)、乳钵、量筒等。
2.2.4、毛笔(从刀上刷取切片用)、铅笔(HB、3H或6H铅笔绘图用)、带盖搪瓷盘(装切片标本用)、纱布、绷布、滤纸、火柴等。 3、试液
3.1、水合氯醛试液 此液为常用封藏液,也是透化剂。可使干缩的细胞膨胀而透明,并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质、叶绿素及挥发油等,加热后透化效果更为明显。
3.2、甘油醋酸试液(斯氏液) 此液为常用封藏液。专用于观察淀粉粒形态,可使淀粉粒保持原形,便于测量其大小。
3.3、甘油乙醇试液 此液为封藏液,也是软化剂。常用于保存植物性材料及临时切片,有软化组织的作用。 3.4、苏丹III试液 此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。 3.5、钌红试液 此液可使黏液染成红色。本液应临用新制。
3.6、间苯三酚试液 此液与盐酸何用,可使木化细胞壁染成红色或紫红色。 3.7、碘试液 此液可使淀粉粒染成蓝色或紫色;蛋白质或糊粉粒染成棕色或黄棕色。
3.8、硝铬酸试液 此液为常用的“植物组织解离液”,解离浸泡时间,按样品的质地不同而异。 3.9、α-萘酚试液 此液可使菊糖染成紫红色,并很快溶解。 3.10、硝酸汞试液(米隆试液) 此液可使糊粉粒染成砖红色。
3.11、氯化锌碘试液 此液用于检查木质化与纤维素细胞壁,前者显黄棕色,后者显蓝色或紫色。 以上水合氯醛等试液,均应符合《中国药典》2010版附录XV B规定。
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