我们目前的柱子均是很新的色谱柱，但是随着时间推移，柱子的柱效会越来越低，此外我们可能要借用QC或者二楼的比较老的色谱柱，来进行方法开发或者验证与样品测定。用柱效差的色谱柱可能误导我们实验的方向，以及影响实验的测定结果。总之因为种种原因，在使用一根色谱柱前，对其进行柱效标定已经显得尤为必要，因此制定本方案，来对柱子柱效进行测定。
对于如下情况，我们在使用色谱柱前需要对其进行柱效测定，且柱效测定时不要接保护住：
1.柱子使用两年之后且柱效明显下降的情况下再启用。 2.柱子用过离子对试剂之后，再使用的。
3.其它特殊原因：如柱子经过反接后使用的。不耐受纯水的柱子经纯水相冲洗的。超过柱子柱温或者pH耐受范围使用的等。
因为柱子的种类很多，C18、C8、苯基柱、氨基柱、氰基柱、离子交换柱、手性色谱柱、聚合物型色谱柱等等。不同填料的柱子可能需要选用不同的标准物质对其柱效进行标定。我们报买色谱柱后首先要保留其使用说明书，以备经后柱效标定时参考。因为柱子说明书上一半都会有该色谱柱的柱效标定出厂报告以及其合格接受标准。
对于实在无法找到使用说明书的柱子我们可以根据其性质来拟定一个通用的标定规则。
1.C18、C8类型色谱柱：
对于该类型色谱柱，一般常用含苯环化合物进行柱效标定。常见的如：苯、苯酚、甲苯、萘、尿嘧啶等。理论塔板数不低于2000/米。拖尾因子在0.9~1.1之间。最终柱效的接收标准还是首选参考柱说明书的要求来定。
例如：UV254nm检测波长；乙腈-水（60:40）或甲醇-水（70:30）等度洗脱15min，进样体积10μl。
2.氨基柱
该种类型色谱柱常用于糖类物质测定，可以选择常见类型的糖类，并选用视差或者ELSD、CAD等通用型检测器对柱效进行标定。
常见的可以选用甘露醇、乳糖等物质标定，理论板数不低于8000。
以TOSOH TSKgel Amide-80 5μm4.6*250mm柱为例：
采用RI检测器，75%乙腈作为流动相，1.0ml/min流速，25℃柱温，2g/L的甘露醇（75%乙腈溶解）作为供试品溶液，进样20μl。出厂标准：甘露醇峰理论板数不低于8000。
3.手性色谱柱
手性柱子又可以分为正相与反相两个体系，其中以正相最为常见，以大赛璐的CHIRALPAK IC-3 4.6*150mm 柱为例：
采用UV检测器，230nm，以正己烷-异丙醇（90:10）为流动相，1.0ml/min流速，柱温25℃。反-二苯乙烯氧化物（0.44mg/ml，溶剂流动相）作为供试品，进样体积：2μl。具体要求参照其说明书即可。
其余类型的色谱柱柱效标定不再一一列举。需要注意的是我们在测定柱效时，组份的理论塔板数不单单与柱子相关，还与我们选定的标准物质、标准物质浓度、溶剂、进样体积、柱温、检测器状况、仪器死时间、流速等多种因素均有关系。我们关注的柱效好坏也不应该仅仅是理论板数的高低，拖尾因子、分离度等均是我们需要关注的情况，此外柱压力也要引起注意。最为理想的柱效测定情况是采用相同的仪器，相同色谱条件对不同时间的同一根柱子进行测定。我们只能尽可能的满足与柱说明书相同色谱条件的情况下，对一根柱子进行柱效测定，这样得出的柱效是否降低的结论才有意义。
如何判断一根色谱柱已经失效：
一根HPLC柱是否失效，除了看色谱柱本身的性能参数外，还要看具体的分析要求。
首先我们选用的柱子如果在测定项目中规定了相应的系统适用性要求，那么一旦柱子不满足这个要求之后，就应该对这根柱子考虑进行再生或者报废。一些色谱柱在一定条件下可以对其修复，修复后还可以继续使用。但是如果一根柱子多次修复后仍出现以下一些情况，那么它可以说是真的结束了它的使命：
（1）柱压很高。单一溶剂如乙腈作流动相时柱压超过1500PSI或10MPa，混合溶剂超过4500PSI，长时间仪器难以承受。
（2）用柱效测定的条件测定，色谱峰明显呈现拖尾或者前沿峰。 （3）用柱效测定的条件测定，柱效明显偏低，如低于2000/米，峰很宽。
（4）用柱效测定的条件测定，所有峰都出现双峰或者肩峰。 （5）柱压很低，进样后样品基本无保留，色谱柱穿漏。
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容