1. 分析项目 测定水样的五日生化需氧量（BOD5） 。
2. 所需实验仪器
2.1 恒温培养箱 2.2 溶解氧瓶（250ml） 2.3 5—10L 容器 2.4 1000ml 量筒 2.5 酸式滴定管 2.6 玻璃搅棒：棒的长度应比所用量筒高度长 200mm。在棒的底端固定一个直径比量筒 底小、并带有几个小孔的硬橡胶板。 2.7 虹吸管 2.8 其他常用实验室仪器
3.所需试剂
3.1 磷酸盐缓冲液：将 8.5g 磷酸二氢钾、21.75g 磷酸氢二钾、33.4g 七水合磷酸氢二 钠和 1.7g 氯化铵溶于水中,稀释至 1000ml。此溶液的 pH 值应为 7.2。
3.2 硫酸镁溶液 ：将 22.5g 七水合硫酸镁溶于水中,稀释至 1000 ml。
3.3 氯化钙溶液: 将 27.5g 无水氯化钙溶于水,稀释至 1000ml。
3.4 氯化铁溶液: 将 0.25g 六水合氯化铁溶于水,稀释至 1000 ml。
3.5 盐酸溶液(0.5mol/L):将 40 ml(=1.18g/ml)盐酸溶于水,稀释至 1000ml 。
3.6 氢氧化钠溶液(0.5mol/L): 将 20 g 氢氧化钠溶于水,稀释至 1000ml 。
3.7 亚硫酸钠溶液(1/2Na2SO3=0.025 mol/L):将 1.575g 亚硫酸钠溶于水,稀释至 1000 ml。此溶液不稳定,需每天配制。
3.8 葡萄糖—谷氨酸标准溶液： 各 称 取 150 ± 1mg 预 先 在 103 ℃ 下 干 燥 1h 的 无 水 葡 萄 糖 (C6H12O6) 和 谷 氨 酸
(HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH)，溶于蒸馏水中，稀释至 1000 ml,并混合均匀。(此溶 液临用前配制)。
4.采样及样品保存
于指定地点,用玻璃或聚乙烯采样瓶采集适量水样,带回实验室在 2 小时内进行分析, 否则应在 0—4C 下保存, 并在 6 小时内进行分析,如果不能在 6 小时内分析,则应将 贮存时间和温度与分析时间一起报告,决不能超过 24 小时才分析。
5.分析程序
5.1 稀释水的制备在 5—10L 容器内装入一定量的水，控制水温在 20C 左右。然后用气 泵曝气 4—6 小时， 使稀释水中的溶解氧接近饱和。容器口盖以两层经洗涤晾干的 纱布，置于 20C 左右室温中放置数小时，使水中溶解氧含量达 8mg/L 左右。临用 前每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸缓冲液各 1ml，并混 合均匀。稀释水的 pH 值为 7.2。
5.2 接种稀释水的制备
新鲜的 A/0 池混合液稍沉淀片刻， 取上层液加入刚制备的稀释水 中，每升稀释水中约加入 2ml 上层液。临用前配制。接种稀释水的 BOD5 应在 0.3－1.0 mg/L 为宜。
5.3 水样的预处理
5.3.1 水样的 pH 值若超出 6.5—7.5 范围,可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节，但用量 不要超过水量体积的 0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或 酸液进行中和。
5.3.2 当采集的水样温度偏低时，应迅速使水样升温至 20C 左右，在不使满瓶的情 况下充分振摇时时开塞放气，以赶出过饱和的溶解氧。当采集的水样温度偏 高时，应迅速使水样温度冷却至 20
C 左右，并充分振摇，使与空气中氧分压 接*衡。
5.3.3 若样品中含游离氯或结合氯，应加入所需体积的亚硫酸钠溶液（3.7） ，使游离 氯和结合氯失效，注意避免加过量。
5.4 用少量稀释水把两个培养瓶洗涤一两次，再用虹吸管把稀释水注满两个培养瓶并 溢出少许，加塞。此为空白。瓶内不应留有气泡，其中一个培养瓶立即测定溶解 氧。另一个培养瓶的瓶口进行水封后，放入 20± 1C 的恒温培养中。
5.5 取一干净的 1000ml 量筒， 根据水样的 CODcr 范围， 从附表中找出合适的 f2 值。 对 水样进行稀释。要求添加水样或稀释水时均用虹吸的方法，不能产生气泡。根据 不同的稀释比配制 800ml 水样。
5.6 从开始放入培养箱算起，经过五昼夜后，弃去封口水，测定剩余的溶解氧。
5.7 水中溶解氧的测定:依据碘量法溶解氧检测指导书 。
5.8 验证试验 为了检验接种稀释水、接种水和分析人员的技术，需进行验证试验。将 20 ml 葡 萄糖—谷氨酸标准溶液（3.8）用接种稀释水(5.2)稀释至 1000 ml,并按 5.5、
5.6、 5.7 的步骤进行测定。得到的 BOD5 应在 180-230 mg/L 之间，否则应检查接种水， 如果必要还应检查分析人员的技术。
6. 五日生化需氧量的计算
（D1—D2）—（B1—B2）f1 BOD5 = f2
式中：D1—接种稀释水样在培养前的溶解氧。
D2—接种稀释水样在培养后的溶解氧。
B1—接种稀释水在培养前的溶解氧。
B2—接种稀释水在培养后的溶解氧。
f1—接种稀释水在培养液中所占的比例。
f2—水样在培养液中所占的比例。
7.注意事项
7.1 玻璃器皿应彻底洗净。先用洗涤剂浸泡清洗，然后用稀盐酸浸泡，最后依次用自来 水、蒸馏水洗净。
7.2 在用虹吸管、吸量管等移取水样、药品或加稀释水时，管口均要浸入液面下，以免 操作过程中产生气泡，影响测定的准确性。
7.3 接种稀释水 BOD5 应在 0.31.0mg/L 之间,配制后应立即使用。
7.4 接种稀释水样的五日耗氧应大于 2 mg/L,五日培养后的残留溶解氧应大于 1 mg/L。 一般五日内消耗的溶解氧占原来溶解氧的 40%—70%为最好。
7.5 各取样点的 f2 值： 初沉池：0.010， 0.008， 0.006 二沉池：0.5， 0.3， 0.2 放流井：1， 0.9， 0.8
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