*CN102977165A*
(10)申请公布号 CN 102977165 A(43)申请公布日 2013.03.20
(12)发明专利申请
(21)申请号 201210526367.8(22)申请日 2012.12.07
(71)申请人上海交通大学
地址200240 上海市闵行区东川路800号(72)发明人李晓波 王梦月 邢世华 杨婵(74)专利代理机构上海交达专利事务所 31201
代理人王毓理 王锡麟(51)Int.Cl.
C07H 17/07(2006.01)C07H 1/08(2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 2 页权利要求书1页 说明书4页 附图2页
(54)发明名称
罗汉果黄素的优化提纯制备方法(57)摘要
一种生物医药技术领域的罗汉果黄素的优化提纯制备方法，通过将罗汉果水煮液采用大孔树脂吸附并经洗脱得到罗汉果黄素浸膏，再将罗汉果黄素浸膏进行Sephadex LH-20柱层析并洗脱后收集其中流份并重复层析洗脱操作至少一次，得到纯度大于95%以上的罗汉果黄素精制品。本发明具有纯度高、得率高、工艺简单、成本低等优点。
CN 102977165 ACN 102977165 A
权 利 要 求 书
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1.一种罗汉果黄素的优化提纯制备方法，其特征在于，通过将罗汉果水煮液采用大孔树脂吸附并经洗脱得到罗汉果黄素浸膏，再将罗汉果黄素浸膏进行Sephadex LH-20柱层析并洗脱后收集其中流份并重复层析洗脱操作至少一次，得到纯度大于95%以上的罗汉果黄素精制品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述方法具体包括如下步骤：1）先将罗汉果粉碎，加入水煎煮，离心，取上清液；2）将步骤1）中的上清液过大孔树脂，50%（v/v）酒精洗去杂质后采用60-80%（v/v）酒精洗脱，回收溶剂，收集其中流份，即罗汉果黄素浸膏；
3）将步骤2）所得的罗汉果黄素浸膏，进行Sephadex LH-20柱层析，60%-100%（v/v）的甲醇或其水溶液洗脱，回收甲醇并收集其中流份，得到罗汉果黄素粗品；
4）取罗汉果黄素粗品进行Sephadex LH-20柱层析，收集其中流份得到纯度大于95%以上的罗汉果黄素精制品。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是，所述的罗汉果为干燥、成熟果实。4.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的溶剂为水，提取1-2次。5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是，所述的大孔树脂为HZ-801或D101型。6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是，所述的Sephadex LH-20柱层析的填料用量为2.5cm×60cm。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的酒精洗脱是指：以10mL/min流速洗脱至洗脱液无色，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇供下次使用。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的甲醇或其水溶液洗脱是指：以3mL/min流速、30mL/流份洗脱至洗脱液无色，减压回收甲醇供下次使用。
9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是，所述的收集其中流份是指：采用TLC检测，其中：展开剂采用氯仿-甲醇-水为60：35：5的体积比配置；显色剂采用10%(v/v)硫酸-乙醇；通过加热显色进行检测，合并含罗汉果黄素的所有流份。
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说 明 书
罗汉果黄素的优化提纯制备方法
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技术领域
本发明涉及的是一种生物医药技术领域的方法，具体是一种罗汉果黄素的优化提
纯制备方法。
[0001]
背景技术
罗汉果黄素为黄酮苷类化合物，目前发现该成分仅局限分布在葫芦科植物罗汉果
SiraitiagrosvenoriiSwingl(MomordicagrosvenoriiSwingle)的成熟果实中。其结构式如：
[0002]
罗汉果为中国特有经济、药用植物。罗汉果黄素为罗汉果的特征性成分，具有抗氧
化、抗菌、抗补体等活性，可作为理想的天然黄色素用于食品、饮料的着色剂，色度高，安全无毒副作用；高纯度的罗汉果黄素可作为化学对照品用于罗汉果药材、含罗汉果制剂的定性鉴别及定量分析。罗汉果黄素在罗汉果中含量较低。因此，如何从罗汉果中制备罗汉果黄素具有重要意义。[0004] 《药学学报》于1994年2月（29卷第2期），158页-160页，名称为“鲜罗汉果中黄酮甙的分离及结构测定”公开了一种从鲜罗汉果分离罗汉果黄素的方法，即：新鲜罗汉果用水提取，水溶液经大孔树脂柱层析、硅胶柱层析后，重结晶得到罗汉果黄素。这种方法要求使用新鲜罗汉果，而市售商品罗汉果均为干果；同时，采用该方法制备罗汉果黄素收率低于十万分之二，操作繁琐，成本高，不利于大量制备罗汉果黄素。
[0003]
发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种罗汉果黄素的优化提纯制备方法，具有纯度高、得率高、工艺简单、成本低等优点。[0006] 本发明是通过以下技术方案实现的：本发明通过将罗汉果水煮液采用大孔树脂吸附并经洗脱得到罗汉果黄素浸膏，再将罗汉果黄素浸膏进行Sephadex LH-20柱层析并洗脱后收集其中流份并重复层析洗脱操作至少一次，得到纯度大于95%以上的罗汉果黄素精制品，具体步骤如下：[0007] 1）先将罗汉果粉碎，加入水煎煮，离心，取上清液；[0008] 2）将步骤1）中的上清液过大孔树脂，50%（v/v）酒精洗去杂质后采用60-80%（v/
[0005]
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v）酒精洗脱，回收溶剂，收集其中流份，即罗汉果黄素浸膏；[0009] 3）将步骤2）所得的罗汉果黄素浸膏，进行Sephadex LH-20柱层析，60%-100%（v/v）的甲醇或其水溶液洗脱，回收甲醇并收集其中流份，得到罗汉果黄素粗品；[0010] 4）取罗汉果黄素粗品进行Sephadex LH-20柱层析，收集其中流份得到纯度大于95%以上的罗汉果黄素精制品。[0011] 本发明中：
[0012] 所述的罗汉果为干燥、成熟果实。[0013] 所述的溶剂即水，提取1-2次。
[0014] 所述的大孔树脂为HZ-801或D101型。[0015] 所述的收集其中流份是指：采用TLC检测，其中：展开剂采用氯仿-甲醇-水为60：35：5的体积比配置；显色剂采用10%(v/v)硫酸-乙醇；通过加热显色进行检测，合并含罗汉果黄素的所有流份。
有益效果[0016] （1）通过罗汉果干果水煎煮、然后将水煎液通过大孔树脂、Sephadex LH-20柱即可得到高纯度罗汉果黄素。采用上述方法制备的罗汉果黄素，纯度高，在95%以上；工艺简便、得率高，可达0.1%以上。[0017] （2）采用水煎提取的方法，去除了罗汉果中大部分脂溶性成分（如油脂、蜡质）；经济安全，同时也提高了提取的效率。[0018] （3）采用大孔树脂纯化，先用低浓度的乙醇洗脱，除去了大部分皂苷、糖等水溶性杂质的干扰；同时，乙醇又可回收反复使用，节约了成本。[0019] （4）罗汉果黄素浸膏先进行1次Sephadex LH-20柱层析，去除了剩余的罗汉果皂苷，方便获得罗汉果黄素粗品；粗品再次进行Sephadex LH-20柱层析，即可获得高纯度的罗汉果黄素。整个过程中样品损失少，Sephadex LH-20填料又可再生后使用、洗脱溶剂甲醇可回收后反复使用，大大降低了成本。附图说明
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图1为罗汉果黄素核磁共振图谱：H-NMR（500MHZ，DMSO-d6）
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[0021] 图2为罗汉果黄素核磁共振图谱：C-NMR（125MHZ，DMSO-d6）
[0020]
具体实施方式
[0022] 下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
[0023] 本实施例是在以下实施条件和技术要求条件下实施的：[0024] 1）成熟罗汉果干果200g，粉碎成粗粉，加入1000mL水煎煮0.5h，4800转/分钟离心20min，得水溶液。[0025] 2）取水溶液，缓慢流过HZ-801大孔树脂（6.5cm×80cm，流速5mL/min），先用50%（v/v）酒精洗脱（流速10mL/min）至洗脱液无色，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇供下次使
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用；继用60%（v/v）的酒精洗脱（流速10mL/min）至洗脱液无色，收集洗脱液，减压回收乙醇得罗汉果黄素浸膏4.2g。[0026] 3）将罗汉果黄素浸膏进行SephadexLH-20柱层析（4.0cm×100cm），60%甲醇洗脱（流速3mL/min，30mL/流份）至洗脱液无色，减压回收甲醇供下次使用，TLC检测（展开剂：氯仿-甲醇-水60：35：5；显色剂：10%硫酸-乙醇；显色方法：加热显色），合并主要含罗汉果黄素流份，减压回收溶剂得罗汉果黄素粗品351mg。[0027] 4）罗汉果黄素粗品甲醇溶解，再次加入Sephadex LH-20柱（2.5cm×60cm）中，用60%(v/v)甲醇水溶液洗脱（流速1mL/min，10mL/流份）至洗脱液无色，TLC上述条件检测，合并主要含罗汉果黄素流份，减压回收溶剂得罗汉果黄素精制品219mg，经HPLC检验其纯度为97.1%。
实施例2
[0028] 本实施例是在以下实施条件和技术要求条件下实施的：[0029] 1）成熟罗汉果干果200g，粉碎成粗粉，加入1000mL水煎煮0.5h，4800转/分钟离心20min，取上清液；药渣再次加水800mL，再次煎煮0.5h，离心，取上清液。合并上清液得罗汉果水溶液。[0030] 2）取水溶液，缓慢流经D101大孔树脂柱（6.5cm×80cm，流速5mL/min），先用50%（v/v）酒精洗脱（流速10mL/min）至洗脱液无色，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇供下次使用；继用80%（v/v）的酒精洗脱（流速10mL/min）至洗脱液无色，收集洗脱液，回收乙醇得罗汉果黄素浸膏6.7g。[0031] 3）将含罗汉果黄素的浸膏进行Sephadex LH-20柱（4.0cm×100cm）层析，100%的甲醇洗脱（流速3mL/min，30mL/流份）至洗脱液无色至洗脱液无色，减压回收甲醇供下次使用，TLC检测主要含罗汉果黄素流份（展开剂：氯仿-甲醇-水60：35：5；显色剂：10%硫酸-乙醇；显色方法：加热显色），合并这些流份，减压回收溶剂得罗汉果黄素粗品508mg。[0032] 4）罗汉果黄素粗品甲醇溶解，再次加入Sephadex LH-20柱（2.5cm×60cm）中，用100%的甲醇洗脱（流速1mL/min，10mL/流份）至洗脱液无色，TLC上述条件检测主要含罗汉果黄素流份，减压回收溶剂得罗汉果黄素精制品340mg，经HPLC检验其纯度为96.2%。
实施例3
[0033] 本实施例是在以下实施条件和技术要求条件下实施的：[0034] 1）成熟罗汉果干果200g，粉碎成粗粉，加入1000mL水煎煮0.5h，4800转/分钟离心20min，得水溶液。[0035] 2）取水溶液，缓慢流经D101大孔树脂柱（6.5cm×80cm，流速5mL/min），先用50%（v/v）酒精洗脱（流速10mL/min）至洗脱液无色，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇供下次使用；继用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇得醇浸膏5.1g。[0036] 3）将含罗汉果黄素的浸膏进行Sephadex LH-20柱层析（4cm×100cm），80%（v/v）的甲醇水溶液洗脱（流速3mL/min，30mL/流份）至洗脱液无色，回收甲醇供下次使用，TLC检测主要含罗汉果黄素流份（展开剂：氯仿-甲醇-水60：35：5；显色剂：10%硫酸-乙醇；显色方法：加热显色），合并这些流份，减压回收溶剂得罗汉果黄素粗品422mg。[0037] 4）罗汉果黄素粗品甲醇溶解，再次加入Sephadex LH-20柱（2.5cm×60cm）中，用80%（v/v）的甲醇水溶液洗脱（流速1mL/min，10mL/流份）至洗脱液无色，TLC上述条件检
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测主要含罗汉果黄素流份，合并这些流份，减压回收溶剂得罗汉果黄素273mg，经HPLC检验其纯度为96.7%。
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