选择兽药残留酶联免疫试剂盒的关键因素

选择兽药残留酶联免疫试剂盒的关键因素

作者：刘冬梅 蒲明

来源：《现代农业科技》2015年第20期

摘要 目前，酶联免疫试剂盒已广泛应用于兽药残留和违禁添加药物的检测，但市面上ELISA试剂盒质量参差不齐，如何选择合适的试剂盒已成为检测机构准确检测的关键。通过产品外观、灵敏度、标准曲线、稳定性、特异性等指标对试剂盒的选择做出客观性评价，以供同行业检测人员参考。

关键词 酶联免疫吸附试验；兽药残留；选择；关键因素

中图分类号 TS207.5；TS207.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）20-0258-01 酶联免疫吸附法检测试剂盒（ELISA检测试剂盒）因其具有的灵敏度高、重现性好、检测成本低、操作简单、样品处理量大等特点，已被广泛应用于兽药残留及违禁添加药物的检测中。但目前市场上的ELISA试剂盒种类繁多，质量参差不齐，如何挑选合适的试剂盒尤为重要。

1 标准曲线

标准曲线的好坏会影响到检测结果，但其不是决定性因素。通过ELISA的标准曲线可以考察2个指标，分别是相关系数和抑制率。 1.1 相关系数

标准曲线的相关系数至少要大于0.98，这是对试剂盒的基本要求。

通常有这样的误区，认为标准曲线的相关系数决定样品检测的准确度。其实不然，样品检测的准确与否有多个因素，其中最关键的一点是看回收率，而相关系数只是较为次要的方面。例如，有时标准曲线做得很好，而样品却出现许多假阳性，这可能是因为样品前处理或加样时操作有误。 1.2 抑制率

在做标准曲线时，没有添加药物的标准品的吸光度值（OD值）是B0，添加了药物的标准品的OD值是B。而B/B0即是抑制率。假定，试剂盒中第1个标准品的OD值是B0，第2个标准品的OD值是B1，那么，一般要求第2个标准品的抑制率B1/B0应该在90%以下，否则前2个标准品的吸光度值太接近，容易造成浓度偏高，出现假阳性。在检测样品时，样品的OD值是B，没有添加药物的标准品的OD值是B0，B/B0应低于120%，否则易造成检测浓度偏低，出现假阴性。

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2 灵敏度

灵敏度反映的是试剂盒检出药物最低含量的能力，但选购试剂盒时灵敏度并非越高越好，最理想的状态是最高残留限量（MRL）或定量限在检测范围的中间位置上，这样可以减少误差，使用时也方便。因此，首先应确定试剂盒的灵敏度是否满足您的需求，若满足，则在MRL或定量限附近做加标试验，至少测定3个平行，验证其回收率，回收率应在试剂盒标识的范围内，若试剂盒没有标识，则应在70%～110%之间。 3 稳定性

试剂盒的稳定性可以通过考察批内、批间变异系数和将到期试剂盒性能来判断。 3.1 批内和批间变异系数的判定

批内和批间变异系数的判定数据参照《兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案参考评判标准》（农医发〔2005〕17号）[1-2]。选取阴性样品做加标试验，测定试剂盒的批内变异系数和批间变异系数。对于有最高残留限量（MRL）的药物，添加浓度为MRL浓度；对于禁用药物，添加浓度为定量限，添加浓度至少测定5个平行样。批内变异系数：同一批次的试剂盒，任意选择几条酶标微孔板条做加标试验，平行样之间的变异系数应≤25%，对于禁用药物应≤30%。批间变异系数：同一型号、不同批次的试剂盒，任意选择几条酶标微孔板条做加标实验，平行样之间的变异系数值应≤30%，对于禁用药物应≤40%。 3.2 将到期试剂盒性能的判定

试剂盒保质期还剩2～3个月时，通过使用试剂盒并查看吸光度值、标准曲线和加标回收率判定其是否仍然有效。第1个标准品的OD值低于0.8或标准曲线的相关系数低于0.98，都说明试剂盒品质降低，稳定性较差；加标回收率应在试剂盒标识范围，若试剂盒没有标识加标回收率的，则应在70%～110%之间[3]。 4 特异性

在试剂盒中，特异性常用交叉反应率表示。与待测药物相似结构的物质可能和酶标板上的抗原结合，产生交叉反应，使测定结果升高，还可能导致假阳性。对于检测单一药物的试剂盒，其他相似药物的交叉反应率越低，说明试剂盒特异性越强，市面上的克伦特罗ELISA检测试剂盒、磺胺二甲基嘧啶试剂盒都是这一类型。但如果是检测某一类药物的试剂盒，几种药物的交叉反应率越接近越好，例如某某厂家的氟喹诺酮类ELISA检测试剂盒、磺胺“七合一”ELISA检测试剂盒等[4]。 5 产品外观

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观察试剂盒外包装是否有产品名称、生产厂家、试剂盒型号、批号、生产日期等标识，盒内是否有说明书、质控检验单，若其中多项没有则需注意，此试剂盒可能不是合格的产品。盒内封装试剂在正常情况下应是澄清、透明液体，不应出现结晶、絮状物或沉淀。取出试剂盒在常温下回温30 min，观察试剂瓶里的试剂体积是否和瓶上标识体积一致，是否有标签脱落、漏液的现象。若试剂瓶有结晶，可加长回温时间，并且振摇使其加快溶解。若还是无法溶解，属于产品质量问题[5-6]。 6 其他指标

试剂盒在保证数据准确的前提下，也应考虑其他方面的因素，诸如：试剂盒的检测方法是否简便、耗时少；厂家的售后技术服务是否到位；价格与同等质量的试剂盒相比是否有优惠等[7]。 7 结语

为保证检测工作能够顺利进行，避免重复无效操作造成经济效益的损失，确保检测工作准确、有序进行，在购买和选择试剂盒过程中要坚持以下5点：一是试剂盒要有完整标识，盒内试剂澄清、透明，无絮状物或沉淀，厂家售后及时到位，物有所值；二是灵敏度需满足检验需求，MRL或定量限浓度最好在标准曲线中间位置；三是标准曲线的相关系数在0.98以上，第2个标准品的抑制率应低于90%，样品的抑制率应普遍低于120%；四是批内和批间变异系数应符合《兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案参考评判标准》的要求；五是检测单一药物的试剂盒，其他相似药物的交叉反应率越低，特异性越好。 8 参考文献

[1] 农业部.兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案审查技术资料要求：农医发〔2005〕17号[S/OL].[2015-09-01].http：//wenku.baidu.com/link？url=pYFd-j13mLholqn9v8yPlywGGgU7Jdq8_SHAVcuGO0liSQuo15TjxktgYgy-Om 4tuYVmGLcW-NapFd9GiFlvxVZTccw1d8pE7ed7MI3zeDy.

[2] 农业部.兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案参考评判标准：农医发〔2005〕17号[S/OL].[2015-09-01].http：//wenku.baidu.com/link？url=pYFd-j13mLholqn9v8yPlywGGgU7Jdq8_SHAVcuGO0liSQuo15TjxktgYgy-Om 4tuYVmGLcW-NapFd9GiFlvxVZTccw1d8pE7ed7MI3zeDy.

[3] 杜小粉，董全.酶联免疫吸附分析技术及其在食品农药残留检测中的应用[J].食品科学，2009（30）：330-333.

[4] 水小溪.ELISA技术在食品安全检测中的应用[J].生命科学仪器，2008（6）：51-54.

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[5] 王丽娜，郝利忠，韩春晓，等.兽药残留检测中酶联免疫试剂盒的选择原则与使用注意事项[J].现代畜牧兽医，2013（7）：46-49.

[6] 刘百红.磺胺类药物残留ELISA快速检测试剂盒的研制[D].武汉：华中农业大学，2006. [7] 杨扬.青霉素类药物残留ELISA检测方法研究[D].杭州：浙江大学，2006.