动物急性毒性试验-小鼠

通过实验，培养学生科研设计能力，提高学生科研思维素质；学习药物急性 毒性实验的测定方法（统计方法）及观察方法。 1、计算敌百虫半数致死量。 [实验材料]

小白鼠（雌雄均可，18-22 g）、鼠笼、1ml注射器、苦味酸溶液、敌百虫等。（计算机仿真实验） [实验方法]

1. 预试验：取小鼠24只，以4只为一组分成6组，选择组间距较大的一系列剂量，各组分别灌胃给药敌百虫，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围。

2. 正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用5个剂量，相邻剂量之间的比例为1：0.7。将小鼠随机分组，每组10只小白鼠灌胃给药敌百虫。

3. 观察纪录给各种反应：潜伏期，中毒现象，开始出现死亡的时间，死前的现象，各组死亡的只数等。通常药后要观察3-7天。根据各组动物的死亡率，用改良寇氏法（Korbor）或简化机率单位法算出LD50和可信限。 [实验结果]

在给药后1 小时内，随药物剂量的增加，小鼠中毒的潜伏期逐渐缩短，中毒症状随药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐加重（口吐泡沫→大小便失禁→肌肉僵直→兴奋→死亡）。给药后3 小时内各组小鼠死亡情况见下表：

动物数

组别

（n）

1 2 3 4 5 [结果计算]

10 10 10 10 10 i=0.15

给药剂量 （mg/kg）

384 548 784 1120 1600

对数剂量 （X） 2.58 2.74 2.89 3.05 3.20

动物死亡数

1 3 4 6 8

死亡率 （P） 0.1 0.3 0.4 0.6 0.8 ∑P=2.2

P2

0.01 0.09 0.16 0.36 0.64 ∑P2=1.26

实验完毕后，清点各组死亡鼠数并计算出死亡率（P），采用改良寇氏（Korbor）法计算LD50。

logLD50=XK－i (∑P-0.5)= 3.20－0.15×(2.2－0.5)=2.945·······（1）

LD50=log2.945=811.05(mg/kg)

式中：XK：最高剂量的对数值(XK=log 1600= 3.20 )，

∑P：各组动物死亡百分比之和(∑P＝0.1＋0.3+0.4+0.6+0.8=2.2)， i：相邻两组剂量对数值之差（i = log 0.7 =0.15 ）

S×50=i×

式中：Sx50：logLD50的标准误

LD50的95%可信限=log（X50±1.96Sx50）=log（2.945±0.14259）····（3） 式中：X50=logLD50=2.945

LD50的平均可信限=LD50±(LD50的95%可信限的高限-低限)/2·······（4）

=811.1±[log（2.945+0.14259）- log（2.945-0.14259）]/2 =811.1±（log3.08759- log2.80241）/2

-1

-1

-1

-1

-1

-1

－1

=0.15×0.485=0.07275·········（2）

=811.1±（1223.45- 634.45）/2 =811.1±294.5

所以 LD50=811.1±294.5（mg/kg）